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脱离红细胞后的血红蛋白四聚体结构不稳定、氧亲和力强、半衰期短,还会引起一定的肾毒性。化学修饰作为一种新兴技术,能有效地改善上述不良特性。无基质猪血红蛋白(SFH)由新鲜猪血溶血制得并经超速离心。0.45μm到0.22μm微孔滤膜过滤等步骤纯化,纯化产物与双(3,5-二溴水杨基)延胡索酸酯(简称DBBF)以1:2的摩尔比在脱氧、pH7.2、37℃环境中反应2小时,所得产物(DBBF-pHb)的氧亲和方大大下降,与天然蛋白质相比,DBBF-pHb具有明显的抗α2β2四聚体解聚的特性。经NHS活化酶活性mPEG以30:1的摩尔比与DBBF-pHb在脱氧室温条件下进一步反应,对所得产物的半饱和氧分压(P50)、希尔系数(Hill)等有关血红蛋白携氧能力参数以及修饰程度和分子量的测定表明,这样的偶联修饰获得了携氧能力好、分子量适宜、四聚体稳定的产物mPEG-DBBF-pHb。 研究了SFH、DBBF-pHb以及mPEG-DBBF-pHb对动物免疫系统的影响。SFH引起的抗体滴度为1:400,DBBF修饰的血红蛋白的免疫原性明显增加,抗体滴度为1:3200;mPEG修饰有效降低其免疫原性,抗体滴度仅为DBBF-pHb的1/4。 从细胞超微结构方面分析了DBBF-pHb、mPEG-DBBF-pHb保存心肌细胞的效果。在Krebs-Henseleit心脏保存液中分别加入DBBF-pHb和mPEG-DBBF-pHb,用上述两种液体和单纯的Krebs-Henseleit心脏保存液低温保存离体兔心脏左心室组织块24hr作为实验组,离体即刻的心脏组织块作为对照组。DBBF-pHb和mPEG-DBBF-pHb的保存效果较单纯Krebs-Henseleit保存液好。 构建失血性休克模型评价修饰血红蛋白的复苏功效及生理功能。换血量为15%时,小白兔成活率为100%;血液生化指标测定显示,SFH灌注后乳酸脱氢酶为117 IU/L,mPEG-DBBF-pHb灌注后乳酸脱氢酶为227 IU/L,DBBF-pHb灌注对血浆中乳酸脱氢酶影响较大,乳酸脱氢酶为539IU/L,但仍在正常变动范围之内。动力学参数测定显示,DBBF-pHb组灌注后5min后升压效果最明显(从30mmHg升高到107 mmHg);SFH组在灌注后5min后升压效果明显,然后有一定的下降趋势;mPEG-DBBF-pHb组在输液后60min内能维持比较稳定的血压(平均为106 mmHg),与基础值相差不大;Ringer Lactate组升压效果最差。mPEG-DBBF-pHb组对心率的影响与全血组类似;SFH组在灌注后5min时心率下降,但随着供氧的恢复,心肌的代谢异常逐渐得以纠正,心率逐渐升高;RingerLactate溶液组的心率在灌注后上升,但随后下降幅度较大。