人工修饰猪血红蛋白及其应用的初步研究

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:haiminglu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
脱离红细胞后的血红蛋白四聚体结构不稳定、氧亲和力强、半衰期短,还会引起一定的肾毒性。化学修饰作为一种新兴技术,能有效地改善上述不良特性。无基质猪血红蛋白(SFH)由新鲜猪血溶血制得并经超速离心。0.45μm到0.22μm微孔滤膜过滤等步骤纯化,纯化产物与双(3,5-二溴水杨基)延胡索酸酯(简称DBBF)以1:2的摩尔比在脱氧、pH7.2、37℃环境中反应2小时,所得产物(DBBF-pHb)的氧亲和方大大下降,与天然蛋白质相比,DBBF-pHb具有明显的抗α2β2四聚体解聚的特性。经NHS活化酶活性mPEG以30:1的摩尔比与DBBF-pHb在脱氧室温条件下进一步反应,对所得产物的半饱和氧分压(P50)、希尔系数(Hill)等有关血红蛋白携氧能力参数以及修饰程度和分子量的测定表明,这样的偶联修饰获得了携氧能力好、分子量适宜、四聚体稳定的产物mPEG-DBBF-pHb。 研究了SFH、DBBF-pHb以及mPEG-DBBF-pHb对动物免疫系统的影响。SFH引起的抗体滴度为1:400,DBBF修饰的血红蛋白的免疫原性明显增加,抗体滴度为1:3200;mPEG修饰有效降低其免疫原性,抗体滴度仅为DBBF-pHb的1/4。 从细胞超微结构方面分析了DBBF-pHb、mPEG-DBBF-pHb保存心肌细胞的效果。在Krebs-Henseleit心脏保存液中分别加入DBBF-pHb和mPEG-DBBF-pHb,用上述两种液体和单纯的Krebs-Henseleit心脏保存液低温保存离体兔心脏左心室组织块24hr作为实验组,离体即刻的心脏组织块作为对照组。DBBF-pHb和mPEG-DBBF-pHb的保存效果较单纯Krebs-Henseleit保存液好。 构建失血性休克模型评价修饰血红蛋白的复苏功效及生理功能。换血量为15%时,小白兔成活率为100%;血液生化指标测定显示,SFH灌注后乳酸脱氢酶为117 IU/L,mPEG-DBBF-pHb灌注后乳酸脱氢酶为227 IU/L,DBBF-pHb灌注对血浆中乳酸脱氢酶影响较大,乳酸脱氢酶为539IU/L,但仍在正常变动范围之内。动力学参数测定显示,DBBF-pHb组灌注后5min后升压效果最明显(从30mmHg升高到107 mmHg);SFH组在灌注后5min后升压效果明显,然后有一定的下降趋势;mPEG-DBBF-pHb组在输液后60min内能维持比较稳定的血压(平均为106 mmHg),与基础值相差不大;Ringer Lactate组升压效果最差。mPEG-DBBF-pHb组对心率的影响与全血组类似;SFH组在灌注后5min时心率下降,但随着供氧的恢复,心肌的代谢异常逐渐得以纠正,心率逐渐升高;RingerLactate溶液组的心率在灌注后上升,但随后下降幅度较大。
其他文献
目的:   我们在前期研究中通过sertoli细胞与生精细胞共培养发现Argonaute2基因可能与血睾屏障相关基因claudin-11表达有关。为了深入研究相关机制,本课题设计构建Ago2基
在苯与1-十二烯烷基化反应体系中考察了沸石分子筛(Y,ZSM-5,Beta,丝光沸石,MCM-22)、负载杂多酸催化剂(PW/SiO、PW/SBA-15)的催化行为(活性、选择性、稳定性等).利用NH-TPD、
该文在无氮气保护下,制备了高分子保护的胶体铜,用来催化丙烯腈水合制丙烯酰胺.这种胶体铜的平均颗粒尺寸在内3nm左右,呈球形,无微孔,在580nm处有特征吸收峰,并有明显的丁达
2015年4月19~20日河源市出现今年以来首场明显强对流天气,该过程有强度强、范围大、影响大的特点.该过程给我市带来重大影响,降雨主要集中在我市西南部,有32个站点录得暴雨以
会议
该文主要对正丁烷氧化法制顺丁烯二酸酐工艺吸收溶剂1,2-环己烷二甲酸二异丁酯的合成工艺进行了研究,以求实现其国产化.在讨论了不同合成路线、不同催化剂及不同反应条件对工
新的植物RNA/DNA病毒病的出现和流行是目前世界农业领域面临的最大威胁之一。   近年来,世界范围内新发现了20多种新的危险性病毒,黄瓜绿斑驳病毒和番茄黄化曲叶病毒就是植
2015年5月19日20时到20日08时,河源市范围内出现了暴雨到大暴雨,局部特大暴雨的强降水过程.河源地处多暴雨区域,每年平均暴雨日数为29.5站次,主要发生在前汛期即4到6月以及后
会议
该论文研究了系列烷基糖苷的合成工艺条件及性能.分别采用葡萄糖法和淀粉法合成了短碳链烷基糖苷.(1)葡萄糖法采用了阳离子交换树脂催化合成甲苷、乙苷和丙苷,可避免设备腐蚀