论文部分内容阅读
木豆是世界第六大食用豆类,也是唯一的木本食用豆类,是人类和动物重要植物蛋白来源,具有高蛋白,耐旱、耐瘠能力强,并具有很好的固氮能力等特点。分布于世界热带亚热带地区,其用途较为广泛,主要作为食用外,还可以兼用作优质蛋白饲料、水土保持、改良土壤和覆盖作物等。植物性蛋白在热带亚热带地区尤为匮乏,木豆作为一种重要富含高蛋白作物,挖掘其优异蛋白基因资源对木豆的育种和其它热带亚热带富含高蛋白作物育种具有极其重要的意义。本试验首次根据大豆、豌豆、菜豆、花生贮藏蛋白序列等同源性设计简并性引物,通过反转录扩增,经琼脂糖凝胶电泳和测序,并利用NCBI数据库及Blast工具,进行分析比对,从木豆材料中得到筛选得到木豆贮藏蛋白基因的1个cDNA片断,长度为833bp。再通过RT-PCR, RACE技术扩增得到该基因的全长cDNA首次从木豆中克隆了木豆贮藏蛋白基因全长cDNA,全长为1595bp,通过ORF软件分析得到一条完整的cDNA序列,经过开放阅读框(ORF)分析,发现该cDNA的包含一个1551bp的开放阅读框(ORF)(16-1566bp),编码516个氨基酸,经统计发现该基因CDS区的A+T含量为50%,C+G含量为50%。该PPGLY蛋白质分子量为57.718kDa,等电点(pI)为4.68。对氨基酸组成分析结果显示,强碱性氨基酸(K,R)48个,占9.30%;强酸性氨基酸(D,E)84个,占16.28%;极性氨基酸(N, C, Q, S, T, Y)153个,占29.65%;疏水性氨基酸(A, I, L, F, W, V)144个,占27.91%。通过NCBI数据库BlastX工具同源性分析表明:大豆贮藏蛋白(1303273A)同源性为83%,野生大豆贮藏蛋白(CAA55977.1)同源性为79%,羽扇豆贮藏蛋白(AEB33710.1)同源性为77%,莲贮藏蛋白(CAR78991.1)同源性75%,菜豆贮藏蛋白(ADR30064.1)同源性为67%,花生贮藏蛋白(AAU21493.1)同源性73%,野豌豆贮藏蛋白(CAA83674.1)同源性为65%,截形苜蓿贮藏蛋白(XP003590690.1)同源性为65%。通过实时荧光定量分析,在不同生育期即营养期、花期和成熟期根、茎、叶、花和籽实中PPGLY基因表明营养期根表达量最小,在成熟期种子表达量最大,生育期总体即:营养期<花期<成熟期,表达量逐渐增加;不同组织表达量也存一定的差异:①营养期:根<茎<叶;②花期:根<茎<叶<花;③成熟期不同组织表达量:根<茎<叶<花<种子。