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脑死亡(Brain Death,BD)供体已在临床器官移植中应用。文献表明,脑死亡供体移植后的并发症、排斥反应的程度、再移植率及死亡率都明显高于活体供体,这说明脑死亡供肾在移植以前即已发生了损伤性改变。研究表明脑死亡能单独诱导多种促炎症因子的释放,并通过神经内分泌系统激活细胞因子的级联反应,引起脏器形态、功能的改变。核因子κB(Nuclear factorκB,NF-κB)调控着细胞因子、炎症介质、生长因子及细胞黏附分子等多种基因的表达,与炎症反应、细胞凋亡和免疫应答密切相关。NF-κB过度激活是否为脑死亡致肾脏损伤的机制之一,尚待研究。吡咯二硫氨基甲酸酯(Pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)被认为是NF-κB的特异性抑制剂。研究表明PDTC在FK506、内毒素、肾切除、血管紧缩素Ⅱ导致的肾脏损伤模型中具有改善肾脏功能,减轻肾脏病理损害的作用,其作用机制是抑制NF-κB的活性。但是PDTC能否影响脑死亡状态下肾脏NF-κB的活性,并对肾脏损伤产生保护作用,国内外尚未见报道。因此,进一步研究NF-κB在脑死亡后肾脏损伤中的作用及PDTC对肾脏损伤的防护作用,将会为脑死亡供肾的保护提供理论依据。目的探讨NF-κB在猪脑死亡肾脏损伤中的作用及PDTC对猪脑死亡后肾脏的防护作用。材料方法25±4kg的健康长白猪18只,随机分为二组,每组各6只。对照组,仅开颅麻醉维持行开、关腹手术;脑死亡组,按照缓慢颅内加压法建立脑死亡模型;PDTC组于判定脑死亡后滴注PDTC(15mg/kg,加入100mL生理盐水中);脑死亡组及对照组于同期静滴等量生理盐水;脑死亡判定的标准:①深昏迷:②瞳孔对光反射和角膜反射消失;③自主呼吸停止;④脑电图呈电静息;⑤阿托品试验阴性;⑥复核间隔时间12小时:复核结果与前述结果相同时方可判定为脑死亡;脑死亡后维持血流动力学和生命体征稳定。在脑死亡后6h、12h、24h开腹经下腔静脉取血5mL,制备血清;并切取同侧肾脏组织,部分置于4%多聚甲醛溶液固定,部分置液氮保存。ELISA法检测血清肿瘤坏死固子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,免疫组化法检测肾脏组织中单核细胞趋化蛋白-1(Molynocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)蛋白表达,实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,RT-FQ-PCR)法测定组织中NF-κB mRNA、MCP-1 mRNA表达,光镜下观察脑死亡肾脏形态变化并检测血清BUN、Cr水平。结果1.肾脏形态学改变:对照组各时间点肾脏形态基本正常;脑死亡组可见肾小管上皮细胞水肿、管腔狭窄、炎细胞浸润。同脑死亡组各对应时间点相比,PDTC组细胞水肿、管腔狭窄、炎细胞浸润减轻。2.血清BUN和Cr水平:对照组各时间点血清BUN、Cr水平无差异(P>0.05);脑死亡组和PDTC组BUN、Cr自脑死亡6h开始升高,并持续到脑死亡后24小时,组内相邻时间点之间差异显著(P<0.05);同脑死亡组相比,PDTC组各对应时间点血清BUN、Cr显著降低(P<0.05)。3.血清TNF-α水平:对照组各时间点血清TNF-α水平无差异(P>0.05);脑死亡组和PDTC组TNF-α水平均自脑死亡后6h开始升高,可持续至24h,组内相邻时间点之间差异显著(P<0.05);同脑死亡组相比,PDTC组各对应时间点血清TNF-α显著降低(P<0.05)。4.肾脏NF-κB mRNA的表达:对照组各时间点NF-κB mRNA表达无差异(P>0.05);脑死亡组和PDTC组NF-κB mRNA表达均自脑死亡后6h开始升高,可持续至24h,组内相邻时间点之间差异显著(P<0.05);同脑死亡组相比,PDTC组各对应时间点NF-κB mRNA显著降低(P<0.05)。5.肾脏MCP-1蛋白和mRNA表达:对照组各时间点MCP-1蛋白和mRNA的表达均无差异(P>0.05);脑死亡组和PDTC组MCP-1蛋白和mRNA表达水平均自6h开始升高,组内相邻时间点之间差异显著(P<0.05);同脑死亡组相比,PDTC组各对应时间点MCP-1蛋白和mRNA显著降低(P<0.05)。结论1.脑死亡后肾脏损伤与NF-κB介导的炎症反应关系密切2.NF-κB抑制剂PDTC可以减轻脑死亡猪肾脏的损伤,其机制可能是通过抑制脑死亡后NF-κB的过度表达从而降低炎症介质的释放发挥对肾脏的保护作用。