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第一章Moesin在人脑星形细胞瘤的表达及意义目的:探讨膜结构伸展刺突蛋白(Moesin)在人脑星形细胞瘤中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学SP方法,检测56例人脑星形细胞瘤和10例正常脑组织中Moesin和Phospho- Moesin的表达,应用RT-PCR测定15例新鲜人脑星形细胞瘤和2例正常脑组织中Moesin的mRNA,并结合临床随访资料分析表达水平与星形细胞瘤临床预后的相关性。结果:Moesin的阳性表达率在人脑星形细胞瘤组96.4%(54/56)和正常脑组织对照组0%(0/10)之间有统计学差异(P<0.01)。Ⅰ-Ⅳ级星形细胞瘤中Moeisn的强阳性表达随肿瘤分级上升而增高(χ2=33.93,Ρ<0.01), Phospho-Moesin的表达结果与Moesin的结果基本一致。RT-PCR检测正常脑组织,Ⅰ-Ⅱ级星形细胞瘤,和Ⅲ-Ⅳ级星形细胞瘤3组之间Moesin的mRNA表达依次增高,表达水平之间有统计学差异(F=66.133,Sig=0.000)。结合临床病理资料分析发现Moesin的强阳性表达和星形细胞瘤分化之间有统计学意义(P<0.01)。Moesin强阳性表达组患者比弱阳性+阴性表达组患者的术后无瘤生存时间短,其差异有统计学意义(χ2=29.85,Ρ=0.000)。结论:Moesin的表达水平与人脑星形细胞瘤的恶性程度密切相关,Moesin的过度表达对星形细胞瘤发展和预后起重要作用,提示Moesin可以作为反映星形细胞瘤预后的一种有价值的分子标志物。第二章siRNA干扰下调Moesin表达对U251细胞生长和侵袭能力的影响目的:本研究旨在探讨RNA干扰(RNA interference, RNAi)对人脑胶质细胞瘤(U251)中Moesin蛋白基因表达的抑制作用及其对U251细胞生长、侵袭的影响。方法:以人脑胶质细胞瘤U251细胞系为研究对象,针对Moesin编码基因设计小干扰RNA(siRNA)片段,转染入细胞,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)筛选沉默效率最高的siRNA片段,并用Western Blot技术定量转染后U251细胞的Moesin蛋白的表达水平。转染后以MTT法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡水平,Transwell法检测侵袭能力的变化,并以扫描电镜观察转染后的细胞形态变化。结果:RT-PCR和Western-blot筛选出MOESIN-139片段沉默效果最好,siRNA转染后U251细胞生长速度减慢,在转染48h时,siRNA组的U251细胞明显生长速度低于空白组和阴性对照组(P<0.01),同时凋亡率上升,siRNA组平均凋亡率为(17.30±2.01)%,远高于空白组平均凋亡率1(1.95±0.33)%,阴性组平均凋亡率(2.02±0.28)%(P<0.01)。siRNA转染后的U251细胞穿过聚碳酯膜的细胞数量也明显减少,由空白组26.47±4.07和阴性组的24.27±3.63减少到转染组的11.53±2.61(P<0.01)。细胞形态发生改变,细胞表面伪足数由空白组的14.2±2.58,阴性组的15.8±1.30下降至转染组的6.6±1.82(P<0.01)结论:siRNA下调Moesin的表达能有效抑制U251细胞的生长,减低其侵袭性;Moesin有可能成为治疗人脑胶质瘤的靶点分子。第三章siRNA干扰下调Moesin表达导致U251细胞生长侵袭能力下降与PDGF和CD44关系的研究背景与目的:本研究旨在探讨Moeisn蛋白参与影响人脑胶质细胞瘤(U251)生长和侵袭可能途径。方法:以人脑胶质细胞瘤U251细胞系为研究对象,针对Moesin编码基因设计小干扰RNA片段转染入细胞,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)筛选沉默效率最高的siRNA片段进行后续实验。通过对设计的3组不同干预的U251细胞(空白组,阴性对照组,转染组)进行RT-PCR测定PDGF的表达,以及流式细胞方法测定CD44的量。结果RT-PCR发现转染组U251细胞中PDGF的mRNA的平均表达为0.09377±0.008546,远低于空白组0.4663±0.01844和阴性对照组0.4570±0.02159,其差异有明显统计学意义(P<0.01);流式检测发现转染组中CD44的表达最低26.73±2.720%与其他2组差异明显(F=173.669,sig=0.000)。结论:U251细胞中Moesin表达下降将导致PDGF和CD44的表达同时下降,同时有生长和侵袭能力明显下降,提示Moesin可能通过调节PDGF与CD44在人脑胶质瘤细胞的生长、侵袭过程中发挥重要作用,Moesin有可能成为治疗人脑胶质瘤的靶点分子。