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目的通过运用RNA干扰技术下调泛素连接酶Ring2基因的表达水平，探讨Ring2在苯并[a]芘致人支气管上皮细胞DNA损伤及组蛋白H2A单泛素化中的作用。方法取对数生长期16HBE细胞，在RNA干扰泛素连接酶Ring2基因前后，分别进行不同浓度B[a]P（0，1，2，4，8，16，32μmol/L）染毒24h；同一浓度(2，8，16μmol/L) B[a]P染毒不同时间（0，1，2，4，8，12，24h）以及同一浓度(2，8，16μmol/L) B[a]P染毒2h后恢复不同时间（0，1，2，4，8，12，24h）实验，用单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA损伤水平，并以Olive尾距值（Olive Tail Moments，OTM）评价DNA损伤程度；用WESTERN-BLOT法检测组蛋白H2A单泛素化水平。结果ⅠRNA干扰前1、单细胞凝胶电泳结果显示：不同浓度B[a]P染毒24h时，随着染毒剂量的升高，各组细胞DNA损伤程度增强，且与对照组相比有统计学意义（P＜0.01）；同一浓度(2，8，16μmol/L) B[a]P染毒不同时间时，随着染毒时间的延长，各组细胞DNA损伤程度增强，且与对照组相比有统计学意义（P<0.01）；2μmol/L B[a]P染毒2h后恢复不同时间时，随着恢复时间的延长，OTM逐渐下降，且在恢复2h后，差异有统计学意义（P＜0.01）；8μmol/LB[a]P染毒2h后恢复不同时间时，与对照组相比，恢复1h时OTM值略升高，但无显著性差异，恢复2h时OTM值开始下降，但无显著性差异，随着恢复时间的延长，各组细胞OTM值下降明显，差异有显著性（P＜0.01）；16μmol/LB[a]P染毒2h后恢复不同时间时，与对照组相比，恢复1h时OTM值有显著性升高（P＜0.01），随着恢复时间的延长，各组细胞的OTM值显著性下降（P＜0.01）。2、WESTERN-BLOT结果显示：不同浓度B[a]P染毒24h时，随着染毒浓度的增高，组蛋白H2A单泛素化表水平增高，且与正常细胞组相比，各染毒组都有显著性差异（P＜0.01）；2μmol/L B[a]P染毒不同时间时，随着染毒时间的延长，组蛋白H2A单泛素化水平增高明显，与对照组相比，染毒2h后差异有统计学意义（P＜0.01）；8μmol/L B[a]P染毒不同时间时，随着染毒时间的延长，组蛋白H2A单泛素化水平增高明显，与对照组相比，各染毒组差异都有统计学意义（P＜0.01）；16μmol/L B[a]P染毒不同时间时，随着染毒时间的延长，组蛋白H2A单泛素化水平增高明显，与对照组相比，染毒4h后差异有统计学意义（P＜0.01）；2μmol/LB[a]P染毒2h后恢复不同时间时，与对照组相比，各染毒恢复组细胞组蛋白H2A泛素化水平增高，差异有显著性（P＜0.01），且在8h处达到最大值；8μmol/LB[a]P染毒2h后恢复不同时间时，与对照组相比，各染毒恢复组细胞组蛋白H2A泛素化水平增高，差异有显著性（P＜0.01），且在8h处达到最大值；16μmol/LB[a]P染毒2h后恢复不同时间时，与对照组（恢复0h）相比，恢复1h时H2A泛素化水平略有增高，差异无显著性，恢复2h时增高明显（P＜0.05），其余各染毒恢复组H2A泛素化水平增高明显，差异有显著性（P＜0.01），且在8h处达到最大值。3、回归分析不同浓度的B[a]P染毒细胞24h组的H2A单泛素化水平(X)与OTM值(Y)有相关关系，且相关的回归方程符合Cubic模型:Y=5.251-278.807X~2+736.392X~3(R~2=0.910 P＜0.01)；2μM B[a]P染毒不同时间组的H2A单泛素化水平(X)与OTM值(Y)有相关关系，且相关的回归方程符合Cubic模型:Y=2.306-38.713X+209.283X~2-234.211X~3(R~2=0.723 P＜0.05)；8μM B[a]P染毒不同时间组的H2A单泛素化水平(X)与OTM值(Y)有相关关系，且相关的回归方程符合Exponential模型:Y=Exp(0.085+11.476X) (R~2=0.77 P＜0.01)；16μM B[a]P染毒不同时间组的H2A单泛素化水平(X)与OTM值(Y)有相关关系，且相关的回归方程符合Cubic模型:Y=13.269-169.591X+669.054X~2-625.192X~3(R~2=0.944 P＜0.01)；2μM B[a]P染毒2h后恢复不同时间组的H2A单泛素化水平(X)与OTM值(Y)有相关关系，且相关的回归方程符合Linear模型:Y=1.574-2.753X~3(R~2=0.603 P＜0.05)；8μM B[a]P染毒2h后恢复不同时间组的H2A单泛素化水平(X)与OTM值(Y)有相关关系，且相关的回归方程符合Cubic模型:Y=7.353-21.907X+41.582X~3(R~2=0.503 P＜0.05)；16μM B[a]P染毒2h后恢复不同时间致组的H2A单泛素化水平(X)与OTM值(Y)有相关关系，且相关的回归方程符合Cubic模型:Y=6.852-23.601X+58.494X~3(R~2=0.750 P＜0.05)。ⅡRNA干扰序列刷选转染效率及基因沉默效率结果：16HBE以50nmol/LsiRNA转染6h后，分别培养24h和30h组，与序列对照组相比，各Ring2干扰组Ring2表达水平降低明显，且差异都有统计学意义（P＜0.01），在培养30h时，对Ring2基因的抑制率最高且达到72%。ⅢRNA干扰后1、单细胞凝胶电泳结果显示：不同浓度B[a]P染毒24h时，随着染毒剂量的升高，各组细胞DNA损伤程度增强，且与对照组相比有统计学意义（P＜0.01）；同一浓度(2，8，16μmol/L) B[a]P染毒不同时间时，随着染毒时间的延长，各组细胞DNA损伤程度增强，且与对照组相比有统计学意义（P＜0.01）；2μmol/L B[a]P染毒2h后恢复不同时间时，随着恢复时间的延长，OTM逐渐下降，且在恢复2h后，差异有统计学意义（P＜0.01）；8μmol/LB[a]P染毒2h后恢复不同时间时，与对照组相比，随着恢复时间的延长，各组细胞OTM值下降明显，差异有显著性（P＜0.01）；16μmol/LB[a]P染毒2h后恢复不同时间时，与对照组相比，恢复2h后各组细胞的OTM值显著性下降（P＜0.01）。2、WESTERN-BLOT结果显示：不同浓度B[a]P染毒24h时，随着染毒浓度的增高，组蛋白H2A单泛素化表水平变化不明显，且与正常细胞组相比，各染毒组都无显著性差异；同一浓度（2、8、16μmol/L）B[a]P染毒不同时间时，随着染毒时间的延长，组蛋白H2A单泛素化水平变化不明显，与对照组相比，各染毒组差异无统计学意义；同一浓度（2、8、16μmol/L）B[a]P染毒2h后恢复不同时间时，与对照组相比，各染毒恢复组细胞组蛋白H2A泛素化水平变化不明显，各染毒组差异无显著性。3回归分析显示，各组H2A单泛素化水平(X)与OTM值(Y)无相关关系。Ⅳ协方差分析显示，在泛素连接酶Ring2降低表达之后，各组染毒B[a]P所致的DNA损伤比Ring2正常表达时更严重，且差异有统计学意义（P＜0.01）。结论1、B[a]P引起的细胞DNA损伤存在剂量效应与时间效应关系。2、B[a]P引起的DNA损伤与组蛋白H2A的单泛素化修饰存在密切关系。3、泛素连接酶Ring2在B[a]P致DNA损伤诱发的组蛋白H2A的单泛素化修饰中发挥重要作用。