山羊妊娠期卵巢组织形态及黄体中Ghrelin的表达研究

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为了解不同妊娠阶段奶山羊卵巢黄体组织结构的周期变化规律,明确各时期黄体组成细胞的分型、各型的结构特征及不同时期的细胞学变化规律,本研究以妊娠4~21周龄的山羊卵巢为试验材料,运用常规组织学石蜡包埋-HE染色方法及透射电镜技术对不同妊娠时期山羊卵巢的组织结构进行详细观察,在此基础上,进一步运用免疫组织化学SP法对不同妊娠时期山羊黄体组织中ghrelin的定位及分布变化规律进行了研究,结合相应时期卵巢内分泌生理特点,探讨ghrelin在卵巢功能中的调节作用及在雌性动物生殖方面的功能意义。结果如下:1.妊娠黄体外包结缔组织被膜,被膜内伸形成小梁;黄体实质主要由粒性黄体细胞(大黄体细胞)和膜性黄体细胞(小黄体细胞)组成,前者数量多,主要位于黄体的中央部,后者数量较少,位于黄体的周边及少量散布于大黄体细胞之间。电镜研究结果表明,大黄体细胞与小黄体细胞的典型区别在于胞质中分泌颗粒和脂滴的分布,大黄体细胞胞质内两种物质的含量较小黄体细胞丰富。在整个妊娠时期均存在黄体细胞的退化现象,退化黄体细胞数量随妊娠进程逐渐增加;黄体细胞的结构退行性变化表现为:细胞形态多变,胞质呈强嗜酸性,胞核固缩或碎裂;电镜下可见细胞器发生变性,核内异染色质数量逐渐增多,后期核膜出现皱缩,线粒体嵴断裂、脱落,分泌颗粒数量减少、脂滴发生退化聚集,滑面内质网减少或消失,细胞质内空泡数量增多、细胞间隙加大。对妊娠前期、中期、后期卵巢组织中生长卵泡及闭锁卵泡的计数和统计分析显示,妊娠前期卵巢上的生长卵泡最多,中期变少,后期又开始增多,闭锁卵泡的数量则随妊娠进程逐渐减少。结果表明,黄体组织的形态结构随所处妊娠的不同阶段而变化,退化黄体细胞数量随周期进程逐渐增多;不同妊娠时期山羊卵巢黄体构型可影响生长卵泡和闭锁卵泡的数量。2. Ghrelin阳性反应主要位于被膜和黄体细胞,各阶段被膜上均存在ghrelin表达,主要为纤维及血管的着色;黄体内ghrelin主要定位于大黄体细胞,另外部分小细胞也有表达,从分布范围和染色强度看,随妊娠进程呈现出少—多—再渐少的变化趋势;通过对各周龄山羊黄体组织中ghrelin阳性产物相对表达量的分析,表明在妊娠早期,黄体组织内就有ghrelin的表达,而后随胚胎发育进程逐渐升高、至中期达最高,然后开始下降, 19周至最低。不同妊娠时期山羊黄体组织中ghrelin的这种周期性表达模式与黄体的功能相适应,提示ghrelin的表达与黄体的功能密切相关。
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