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三叉神经脊束间质核(interstitial nucleus of the spinal trigeminal tract,INV)是位于三叉神经脊束(spinal trigeminal tract,SVT)背侧的数个灰质团块,主要由背侧边缘旁核(dorsal paramarginal nucleus,PaMd)和三叉旁核(paratrigeminal nucleus,PaV)组成。INV经三叉神经(Ⅴ)的一些分支及舌咽神经(Ⅸ)和迷走神经(Ⅹ)接受口面部躯体和内脏神经的初级传入,在外周伤害性信息的汇聚和传递以及对内脏和心血管活动的调制等方面均具有重要作用。 INV内存在多种与伤害性信息传导和调控相关的神经活性物质,如谷氨酸(glutamate,Glu)、ENK、SP和CGRP等。Calbindin D-28k(CB)是钙结合蛋白家族的重要成员之一,可高亲和力地结合细胞去极化时进入细胞内的Ca2+,防止因伤害性刺激过度传入引起的神经元高频放电所致的损伤,并可防止钙依赖性钾外流而使膜产生的超级化,缩短不应期,加快神经信息的传递。近年来对CB在中枢神经系统的分布和功能方面进行了大量的研究,结果表明CB在脑干和脊髓内多存在于与感觉信息特别是伤害性信息传递相关 第四军医大学博士学位论文的核团,如在脊髓背角CB与m 共存于1层长轴突神经元内,并投射到孤束核(nucleus of*thes solitny tract,NTS);延髓背角浅层含 CB的神经元可接受躯体的伤害性信息并投射到臂旁核①BNhNTS内接受内脏伤害性信息的CB神经元投射到终纹床核等,提示脊髓和延髓内含CB的神经元可能参与伤害性信息在中枢内传递的过程。INV内分布有大量合CB的神经元,其中大部分投射到NTS和 PBN,但这些含 CB的投射神经元是否直接接受日面部躯体和内脏伤害性信息;是否与兴奋性递质m 共存并受抑制性递质的调控;口面部躯体传入与内脏伤害性传入信息能否汇聚于含CB的投射神经元,特别是口面部躯体传入纤维终末是否与含CB的神经元形成直接的突触连接等,均是值得深入探讨的问题。 基于上述问题,本课题综合应用逆行和跨神经节追踪结合免疫组织化学的光镜、激光扫描共聚焦显微镜以及免疫电镜等技术,对其进行了较系统的研究。 应用 FG逆行束路追踪结合 CB和 Fm标记法,将荧光金吓G)注射到一侧NTS后,观察到同侧WV内大部分(约74.4O)投射到NTS的FG逆标细胞同时呈CB免疫反应阳性。在投射到NTS的CB神经元中,又有41刀%和 47.4%以及 32.5%的神经元分别接受头面部浅层和深层结构的躯体伤害性信息以及内脏伤害性信息。荧光金注射到一侧PBN后,INV投射到同侧PBN的多数FG逆标细胞(77.3%)呈CB免疫反应阳性;在投射到PBN的含CB神经元中,又有38.5%和52刀%分别接受口面部浅层结构和内脏的伤害性传入信息。 磷酸激活的谷氨酸胺酶(PAG)是合成Gltl的关键酶,是m 能神经元的特异标识物。应用 FG逆行束路追踪结合PAG和 CB或PAG和 F。S免疫荧光组织化学三重标记法,观察到INV内约l/4以上的CB神经元(26.6o)与PAG有共存现象,并且CB与PAG共存的神经元大部分投射到NTS或接 2 第四军医大学博士学位论文受内脏伤害性信息。应用免疫组化双重标记法,在INV内虽然未见GABA与 CB共存的神经元,但却观察到 72%和 63%的 CB和 PAG免疫反应阳性神经元分别显示GABAB受体阳性标记。 跨神经节束路追踪结合免疫组织化学多重标记的激光扫描共聚焦显微镜观察结果显示,eV内投射到NTS或含CB的神经元接受内脏伤害性信息,同时与下牙槽神经的初级传入终末之间形成紧密接触。运用跨神经节束路追踪结合免疫电镜法,在超微结构水平观察到下牙槽神经初级传入终末与CB阳性树突或胞体形成非对称型突触连接。 以上结果提示:INV内含CB的神经元直接接受口面部躯体和内脏伤害性传入信息,并投射到*H和**N;部分含*B的神经元以mU为神经递质,构成了INV至NTS的兴奋性传导通路,并且可能通过GABAB受体受GABA的抑制性调控;INV内含CB的神经元接受口面部躯体和内脏伤害性信息的汇聚,并参与外周伤害性信息向NTS和PBN的传递,进而通过NTS和 PBN可能影响躯体一内脏及心血管反射活动。