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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是最早于1987年在美国首次被发现的一种新型病毒性传染病,是现今世界上危害养猪业最重要的疾病之一。巨噬细胞是一种分布广泛的免疫细胞,可以根据内环境的变化从而极化为不同的类型：经典活化巨噬细胞(M1),以及替代活化巨噬细胞(M2)。猪肺泡巨噬细胞(Porcine alveolar macrophage, PAMs)是PRRSV感染后猪只体内最重要的靶细胞。所以本实验首先通过建立PAMs体外极化模型,研究PAMs极化对PRRSV感染的影响以及PRRSV感染对PAMs影响的动态学变化。实验采用预冷法分离：PAMs,并在体外进行培养,分别用LPS/IFN-γ诱导刺激M1型巨噬细胞；用IL-4诱导刺激分化为M2型巨噬细胞。通过半定量PCR分别检测M1,M2型Marker (M1:IL-1β,IL-12,IL-23和CXCL10; M2: Arg-1, IL-10, PPARy和YM-1)表达量的变化,从核酸水平上证明极化模型的成功。同时用Western blotting从蛋白水平上确定M1型,M2型PAMs的极化成功。之后用500TCID50 HuN4-F5株PRRSV感染极化后的PAMs亚型,在感染后的12,24,36和48h分别通过间IFA和Western blotting对PRRSV的感染量进行测定。结果发现在感染后的12至36h内M1型PAMs中PRRSV的感染量明显低于正常组和M2型PAMs的感染量,而在感染后的48h时M1组中PRRSV的感染量与正常组和M2型PAMs中的感染量基本一致,无显著性的差异。然而PAMs主要通过其表面的模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)发挥其天然免疫防御的功能。那么是否PRRSV感染M1型巨噬细胞对其模式识别受体产生了影响,从而M1型巨噬细胞对PRRSV感染在一段时间内产生了抑制。因此我们通过荧光定量PCR的方法对感染PRRSV的M1型巨噬细胞模式识别受体mRNA的表达量进行了测定,并同时对被认为是巨噬细胞极化的关键调节因子的KLF4基因也进行了测定。而在测定结果中我们意外的发现PRRSV感染极化后M1型巨噬细胞中的KLF4表达量与M1型巨噬细胞对PRRSV复制的影响趋势相似。结果表明感染PRRSV后,随着时间的变化M1型巨噬细胞中KLF4的表达量逐渐降低,在12h达到最低,24h后KLF4的表达量逐渐升高,且在感染后48h时KLF4的表达量与正常组的表达量基本一致,无显著性差异。因此为了进一步研究猪KLF4基因对PRRSV复制的影响,本实验通过PCR技术扩增得到猪KLF4基因,通过TA克隆构建pMD18-T-KLF4重组质粒。酶切鉴定后将KLF4的cDNA亚克隆至pCMV-HA载体,构建重组质粒pCMV-HA-KLF4。转染重组质粒pCMV-HA-KLF4在Marc-145中,12h后感染PRRSV,并在感染后24h通过Western blotting对PRRSV的感染量进行进行测定。结果表明KLF4基因对PRRSV的感染有一定的促进作用。