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目的:研究针刺对大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核神慢性脑缺血性损伤经元的保护作用,并探讨其神经生物学机制。
方法:雄性Wistar大鼠(200-220g)30只,随机分成3组,针刺组,缺血对照组,假手术组,每组10只,其中6只用于制作光镜标本,4只用于制作电镜标本。(1)针刺组大鼠采用电凝法和丝线结扎法,分别阻断双侧椎动脉和左侧颈总动脉,并应用针麻仪(G6805-2A型、输出电压5V)在大鼠的“四白”穴给予针刺,3h/次,1次/天。(2)缺血对照组大鼠只阻断双侧椎动脉和左侧颈总动脉,不予针刺处理。(3)假手术组大鼠不予阻断双侧椎动脉和左侧颈总动脉,不予针刺处理。各组大鼠分别于手术后第15日,相应实验处理后,立即处死,经相应固定液固定后取出脑干,分别制作光镜和电镜标本。光镜标本采用尼氏染色,观察神经元大体形态的改变,计数三叉神经脊束核尾侧亚核内存活神经元的数目。电镜标本用于观察神经细胞超微结构的变化以及有衣小泡的产生和形态。
结果:
1.光镜下观察发现,假手术组大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核内,神经元数量多,个体较小,多呈梭形,细胞核大而圆,着色浅,核仁清晰,尼氏体染色深,分布于细胞核周围。缺血对照组大鼠神经核内神经元数量明显减少,神经元肿胀,空泡变性,部分神经元仅可见模糊轮廓,尼氏体染色浅,数量减少甚至消失。针刺组大鼠神经核内仍明显少于假手术组,神经元形态基本正常。2.电镜下观察发现,假手术组大鼠神经元细胞核大而圆,核仁清晰,胞浆中可见形态正常的高尔基体,粗面内质网发达,线粒体丰富,线粒体嵴清晰,排列规则。缺血对照组大鼠,神经元细胞核变形,核膜凹陷,可见核袋或假包涵体,高尔基体扩张,粗面内质网脱颗粒,线粒体肿胀,线粒体嵴模糊甚至消失。与缺血对照组比较,针刺组细胞结构改变较轻,细胞核仍可见核袋形成。在针刺组观察到了有衣小泡,其中大部分含有深浅不一的致密核心,核心与外包质膜之间留有狭窄空晕,少数致密核心较大者空晕消失,质膜外附有毛刺状外衣,大部分有衣小泡位于细胞膜附近,有时多个有衣小泡可在细胞膜附近形成有衣小泡簇。也可见到少量有衣小泡与细胞膜相连影像。3.针刺组三叉神经脊束核尾侧亚核内神经元计数(151.33±6.14),多于缺血对照组(132.92±5.91),差别有统计学意义(P<0.01)。但针刺组神经元计数仍明显少于假手术组(190.23±5.91),差别有显著性意义(P<0.01)。
结论:
1.针剌对慢性脑缺血性损伤的神经元有一定的保护作用,其主要作用机制是促进了神经元间膜的再循环及膜包物质的交换。
2.有衣小泡对神经元的保护作用机制可能为(1)调节慢性缺血时神经元之间的物质(细胞膜和细胞内物质)的失衡状态。(2)调节由于慢性缺血所致的神经细胞内外离子和神经递质的失衡状态。
3.这种保护作用并不是对损害因子的直接的抑制和消除,而是通过调节神经元的机能来缓解损伤因素对神经元的影响,提高神经元对缺血的耐受性。