人类8型疱疹病毒RTA对K-bZIP表达和稳定性的影响

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人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)相关病毒人类8型疱疹病毒(Human Herpesvirus8,HHV-8)能导致多种恶性肿瘤,如卡波西肉瘤(Kaposis sarcoma)和原发性渗出性淋巴瘤等的产生。这种病毒有两种生命周期状态:潜伏状态和裂解复制状态。这两种生命周期状态的转变主要是通过复制与转录激活蛋白(Replication and transcription activator, RTA)激活立即早期(IE)基因的表达进行的。  复制与转录激活蛋白通过结合RTA应答元件(RTA response element,RRE),激活ORF57(Open Reading Frame57)、K8、PAN RNA等基因。在HHV-8的早期基因K8中,也存在与ORF57启动子中相似的RRE序列。K8编码的K-bZIP是一种转录调节蛋白,可以与多种蛋白结合调节基因的表达,辅助终止病毒的潜伏状态。K-bZIP蛋白有多个活性位点,能进行多种修饰,说明了K-bZIP蛋白的重要作用。但目前对于RTA调节K-bZIP蛋白的表达和对K-bZIP蛋白稳定性的影响并没有很多研究。  通过与已确定的RRE序列进行比对,本文构建了9个系列缺失的K-bZIP启动子控制下的报告质粒。将RTA质粒与报告质粒共转染293T细胞,通过荧光素酶检测实验(Luciferase assay)发现:RTA能激活K-bZIP的表达,K8启动子中存在RREs。同时,为了探究K-bZIP蛋白在真核细胞中的表达情况以及RTA对K-bZIP蛋白稳定性的影响,构建了3个不同长度的表达K-bZIP蛋白的表达质粒。用Western Blot实验对K-bZIP蛋白受到RTA的影响进行检测,发现:RTA蛋白能降低细胞内K-bZIP的含量,且这个现象具有时间和剂量依赖性;使用蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺(CHX)处理293T细胞后,可以加速K-bZIP在RTA作用下的减少;而当蛋白酶体抑制剂MG132存在时,能抑制K-bZIP的衰减。以上表明,RTA降解K-bZIP蛋白可能是通过26S蛋白酶体途径进行的。  本文的研究有助于了解K-bZIP蛋白与RTA的关系,同时为研究K-bZIP蛋白在HHV-8中的作用提供了相关材料。
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