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背景:敌草快(Diqat,DQ),化学名称:1,1’—亚乙基—2,2’—联吡啶二溴,是一种快速作用的接触性除草剂。1957年在英国首次开发应用,是全球应用广泛的灭生性除草剂,仅次于草甘膦和百草枯。百草枯无论口服或者接触均有很强的毒性,已被多个国家明令禁止或者严格限制使用。2012年我国多个部门联合发布公告,对百草枯水剂实施限制性管理措施,并规定自2014年7月1日起,撤销对百草枯水剂的登记和生产许可,即禁止生产百草枯水剂,并从2016年7月1日起禁售和禁用,只保留母药生产企业水剂出口境外登记,供出口生产。因此近两年敌草快作为百草枯替代品,开始在农业生产过程中被广泛应用,而随之而来的急性敌草快中毒患者的数量也明显增加。敌草快经皮肤、黏膜意外接触、误服或口服吸收,毒性较强,可造成急性中毒,服毒量大者严重甚至导致死亡。口服敌草快中毒,一部分经胃肠道吸收入血,而后随血流分布至全身各个器官组织,其中以肝、肾浓度较高。早期可有消化道粘膜损伤,但较百草枯损伤略轻,临床发现严重中毒早期出现急性肾损伤表现,少尿,无尿等,出现多器官损伤,休克,甚至死亡。国内外对于敌草快的病死率报道不一,迄今为止,对敌草快中毒尚无特效解毒剂,也无明确治疗方案。早期毒物清除很重要,患者中毒后就诊时间越早,及时进行胃肠道洗消处理,早期行血液净化治疗,及早应用糖皮质激素及脏器功能保护,其预后可能越乐观。因此,在救治敌草快中毒患者的时候,在中毒早期对患者的病情进行及时且正确的判断,尽早采取包括激素及脏器保护在内的综合治疗措施,可能对于治疗效果及其预后有帮助。敌草快中毒,可致多器官功能损害,其中急性肾脏损害尤为突出,可能主要与敌草快中毒后的蓄积然后主要从肾脏排泄有关。敌草快中毒后,有毒成分通过引起机体横纹肌溶解、氧化应激、缺血损伤等造成肾小管上皮细胞损伤、坏死,从而造成肾脏排泄功能下降,毒物进一步堆积,如此,造成恶性循环。如不及时诊断与治疗,会危及病人生命。而传统的急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)实验室检查指标,如血清尿素氮(serum urea nitrogen,BUN)和血清肌酐(serum creatinine,Cr),只有在肾小管上皮细胞减少70%-80%时才能提示肾损害,这对疾病早期诊断不利。寻找AKI的早期敏感指标,意义重大。本文重点研究肾损伤相关标志物肾损伤分子1(Kidney injury molecule-1,KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)、及转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)在敌草快中毒后其浓度变化与肾损伤严重程度之间的关系,旨在早期发现肾损害,早期干预,减少敌草快中毒患者的伤害与死亡。目的:建立大鼠敌草快中毒急性肾损伤模型,研究NGAL、KIM-1、TGF-β1等在染毒大鼠血液中不同时期浓度的变化。方法:将180只大鼠饲养1周后,随机分为两个实验组,一组为敌草快染毒组,实验开始一次性给予140mg/kg敌草快稀释液(1/2的半数致死量)加蒸馏水稀释至lml灌胃;另一组为正常对照组,实验开始一次性给予lml生理盐水灌胃。染毒组及对照组动物均分别于灌胃后30分钟,2小时,6小时,24小时,3天,7天,14天,21天,28天分别给予10%水合氯醛(给药量按照3ml/kg)腹腔注射麻醉处死,采用下腔静脉穿刺取血,分别检测大鼠血液中NGAL、TGFβ31、KIM-1的表达,同时留取肾组织行Westernblot检测NGAL、TGFβ1、KIM-1的表达。留取肺和肾组织行常规病理检查和电镜检查。结果:1.染毒组大鼠血液中生化指标变化:尿酸(Uric acid,UA)、BUN、Cr数值在敌草快中毒后逐渐升高,其中UA和肌酐在染毒后半小时出现升高,UA在染毒后24h达到峰值,但一直持续到14d仍高于对照组,肌酐在7d达峰值,而后逐渐下降,至28d天与对照组无明显差异。BUN在染毒后6h出现升高,7-14天达最高值,随后逐渐降低。2.染毒组大鼠血液中蛋白指标变化:NGAL在染毒后0.5h即有升高,24h即达高峰,并且在3天、7天、14天持续呈升高状态,21天后开始有下降趋势。KIM-1在0.5h即开始升高,染毒后在24h、3天、7天持续高峰状态,14天开始出现下降,但仍高于对照组,在21天、28天逐渐下降。TGF-β1在敌草快染毒后变化不明显。3.常规病理HE和MASSON光镜及电镜观察,:肾组织细胞损伤明显,早期随时间延长逐渐加重,染毒动物后期组织损伤慢慢恢复。肺组织可见炎性浸润,纤维化不明显。4.Western blot测定结果:染毒组肾组织TGF-β 1的表达情况与对照组相比,无明显升高;NGAL从2h逐渐升高,至第7-14天达峰,21d开始慢慢的下降;KIM-1从2h开始出现升高,但是6h,24h出现一过性下降,3d,7d再次升高,而后逐渐下降。结论:NGAL、KIM-1是敌草快所致AKI的早期快速性、敏感性及准确性的指标;TGF-β1在敌草快染毒后血液中、组织中浓度变化不大,在敌草快中毒组织纤维化的发生风险低。