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目的:(1)建立人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM并研究其耐药特性及生物学特性。(2)研究粉防己碱(Tetrandrine,Tet)对人鼻咽癌耐药细胞株NNE-1/ADM的逆转作用及其可能机制。(3)研究阿霉素-粉防己碱脂质体对人鼻咽癌耐药细胞株NNE-1/ADM的逆转作用及其可能机制。方法: (1)采用逐步递增阿霉素(Adriamycin,ADM)浓度,间歇作用体外诱导法培养建立人鼻咽癌HNE-1耐药细胞模型HNE-1/ADM。MTT法测定HNE-1和HNE-1/ADM细胞株的生长曲线、交叉耐药性和耐药指数;用光镜、电镜检测HNE-1/ADM细胞株形态学变化;流式细胞仪检测人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM细胞周期的变化。(2)采用MTT法测定粉防己碱对人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM的逆转作用;流式细胞仪检测粉防己碱对HNE-1/ADM细胞株凋亡作用的影响;免疫组化法和Western blot检测HNE-1/ADM细胞中P-gp、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。(3)采用MTT法测定阿霉素-粉防己碱脂质体对人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM的逆转作用;流式细胞仪检测阿霉素-粉防己碱脂质体对HNE-1/ADM细胞凋亡作用的影响;免疫组化法和Western blot检测HNE-1/ADM细胞中P-gp、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。结果: (1)历时4月建立了人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM,该细胞株耐药性能稳定,耐药指数为10.913倍;并且HNE-1/ADM细胞株与5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)、顺铂(Cisplatin,DDP)、长春新碱(Vincristine,VCR)等多种抗癌药有不同程度的交叉耐药性。HNE-1/ADM细胞株的细胞形态与亲代细胞HNE-1相比较发生了变化;体外细胞群体倍增时间较亲代细胞延长11.86h;细胞周期分析结果显示HNE-1/ADM耐药细胞株S期与G0/G1期细胞减少、G2/M期细胞增多。(2)粉防己碱能逆转HNE-1/ADM对抗肿瘤药物ADM的耐药性,使其耐药指数从10.913降至3.130;1.0μg/ml Tet不能诱导HNE-1/ADM细胞凋亡,但其可以提高ADM对耐药细胞的凋亡作用;免疫组化法和Western blot检测HNE-1/ADM细胞株中P-gp、Bcl-2、Bax的蛋白表达发现,粉防己碱作用于HNE-1/ADM细胞后,P-gp、Bcl-2的蛋白表达降低,Bax的蛋白表达增强。(3)阿霉素-粉防己碱脂质体与Tet相比能更好地逆转HNE-1/ADM细胞耐药作用,使其耐药指数从10.913降至1.348,逆转倍数为7倍;流式细胞仪检测显示ADM-Tet脂质体对HNE-1/ADM细胞凋亡率高于ADM+Tet对HNE-1/ADM细胞的凋亡率(p<0.05);ADM-Tet脂质体可显著降低耐药细胞中P-gp和Bcl-2的蛋白表达(p<0.05),促进Bax的蛋白表达(p<0.05)。结论:(1)建立了人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM,该细胞株具有耐药细胞株的耐药特性和生物学特性,是研究人鼻咽癌耐药机制及筛选逆转剂较理想的细胞模型。(2)粉防己碱能逆转HNE-1/ADM对抗肿瘤药物ADM的耐药性,能提高ADM对耐药细胞的凋亡作用,其机制可能与降低耐药蛋白P-gp的表达,降低调控凋亡相关蛋白Bcl-2表达和增强Bax的表达有关。(3)与粉防己碱对人鼻咽癌耐药细胞HNE-1/ADM逆转作用相比较,阿霉素-粉防己碱脂质体对人鼻咽癌耐药细胞HNE-1/ADM具有更好的逆转作用,能提高HNE-1/ADM的细胞凋亡率,其机制可能与降低耐药蛋白P-gp的表达以及调控相关蛋白Bax和Bcl-2的表达有关。