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背景：淋巴道转移是影响恶性肿瘤患者预后和生存的主要因素，肿瘤淋巴道转移机制的研究可为其临床诊断和治疗提供依据。Anxa5(AnnexinA5，膜联蛋白A5)是膜联蛋白家族一员。Anxa5表达异常与肿瘤发生发展、侵袭、转移及耐药性等密切相关。但Anxa5与肿瘤淋巴道转移关系的研究鲜有报道。本课题组前期采用基因芯片高通量筛选和蛋白质组学等技术对来源于同一鼠肝癌细胞克隆、遗传背景相同但淋巴道转移潜能显著不同的亚克隆细胞系Hca-F (淋巴结转移率约75%)和Hca-P (淋巴结转移率约25%)的研究表明，Anxa5在Hca-F中的表达是其在Hca-P中的3.16倍，提示Anxa5可能是潜在促进鼠肝癌淋巴道转移的蛋白。目的：1.检测Anxa5在Hca-P和Hca-F中的差异表达；2.构建pcDNA3.1-V5/HisB-Anxa5真核表达质粒，并转染至Hca-P，筛选获得Anxa5表达稳定上调的Hca-P单克隆细胞株；3.观察上调Anxa5后Hca-P细胞形态及亚显微结构的变化；4.探究Anxa5表达上调对Hca-P体外增殖、迁移、侵袭及体内成瘤性及淋巴结转移能力的影响，为进一步研究淋巴道转移机制提供新线索。方法：1. Western blot检测Anxa5在Hca-P和Hca-F中的表达；2. RT-PCR方法扩增小鼠全长Anxa5编码序列，并将构建的pcDNA3.1-V5/HisB-Anxa5表达质粒转染至Hca-P，G418筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株，同时建立稳定转染pcDNA3.1-V5/HisB空质粒的Hca-P细胞株作为对照，Western blot检测Anxa5表达稳定上调的单克隆细胞株；3.倒置光学显微镜观察Anxa5表达上调后Hca-P细胞形态的变化，透射电子显微镜观察上调Anxa5后Hca-P细胞亚显微结构的变化；4. CCK-8法检测上调Anxa5后Hca-P增殖能力变化，Transwell法检测Anxa5表达上调对Hca-P体外迁移和侵袭能力的影响，通过小鼠足垫皮下注射分析Anxa5表达量变化致Hca-P体内成瘤及淋巴结转移情况。结果：1. Anxa5在Hca-F中的表达量是其在Hca-P中的~2.55倍；2.酶切及测序结果显示，pMD19-T-Anxa5克隆质粒和pcDNA3.1-V5/HisB-Anxa5表达质粒构建成功；3.Anxa5上调导致细胞体积增大，细胞内粗面内质网和线粒体数量增加，线粒体肿胀，线粒体内嵴减少，基质密度降低；4.筛选获得Anxa5表达稳定上调的单克隆细胞株Anxa5-Hca-P-1、Anxa5-Hca-P-2和Anxa5-Hca-P-3，与Control-Hca-P相比，Anxa5-Hca-P-1、 Anxa5-Hca-P-2和Anxa5-Hca-P-3中Anxa5蛋白水平分别上调了15.0%、20.3%和67.7%；5. Anxa5-Hca-P-1、Anxa5-Hca-P-2相对于Control-Hca-P增殖明显加快，Anxa5-Hca-P-3与Control-Hca-P相比增殖减慢；6.Anxa5-Hca-P-1、Anxa5-Hca-P-2和Anxa5-Hca-P-3相比于Control-Hca-P的迁移能力分别提高了68.11%、60.15%和167.39%；7.与Control-Hca-P相比，Anxa5-Hca-P-1、Anxa5-Hca-P-2和Anxa5-Hca-P-3的侵袭能力分别提高了47.18%、57.57%和100.03%；8. Anxa5表达上调后各组间肿瘤大小无差异，但能促进肿瘤表观恶性程度；9. Anxa5-Hca-P-1组和Anxa5-Hca-P-3组淋巴结转移程度明显高于Control-Hca-P组，Anxa5-Hca-P-3组淋巴结转移程度明显高于Anxa5-Hca-P-1组。结论：1.Anxa5在鼠肝癌淋巴道转移细胞株Hca-P和Hca-F中均有表达，且在Hca-P中表达低于Hca-F；2. Anxa5表达上调导致细胞体积增大，细胞内粗面内质网和线粒体数量增加，线粒体肿胀，线粒体内嵴减少，基质密度降低；3. Anxa5表达上调促进Hca-P增殖，但当Anxa5上调到一定程度时反而抑制Hca-P增殖；4. Hca-P的迁移能力与Anxa5的表达量呈正相关；5. Anxa5表达上调促进Hca-P侵袭，且促进程度与Anxa5的上调程度正相关；6. Anxa5的表达与肿瘤表观恶性程度相关，与肿瘤大小无关；7. Anxa5表达量增加促进Hca-P淋巴结转移，Anxa5表达量增加越多，转移越明显，Anxa5在肝癌细胞淋巴道转移中发挥重要作用，有望成为新的肝癌基因治疗的分子靶点。