【摘 要】
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研究目的:慢性牙周炎患者的牙周组织在炎症作用下而受损。研究表明,慢性牙周炎不仅仅是一种口腔健康问题,还与糖尿病、心血管疾病、消化道疾病等多种系统性疾病的发生存在相
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研究目的:慢性牙周炎患者的牙周组织在炎症作用下而受损。研究表明,慢性牙周炎不仅仅是一种口腔健康问题,还与糖尿病、心血管疾病、消化道疾病等多种系统性疾病的发生存在相关性。随着分子生物学研究技术和平台的发展,转录组学和蛋白质组学方法已是研究疾病相关分子机制、筛选生物标记物的可靠手段。本论文探讨了健康人群和慢性牙周炎患者牙龈组织的差异表达基因和差异表达蛋白,并进一步探索了差异表达基因RAC2基因多态性与慢性牙周炎发病风险的相关性。方法:本论文利用基因表达综合数据库所提供的健康人群和慢性牙周炎患者牙龈组织的RNA测序数据(GSM2133915和GSM2133916)分析两组间的差异表达基因并利用DAVID富集工具分析差异表达基因所涉及的生物过程和细胞信号通路;收集21例慢性牙周炎患者和21例健康对照人群的牙龈组织样本,利用双向凝胶电泳结合质谱分析的方法比较组间组织样本的蛋白质表达差异;收集231例慢性牙周炎患者和195例健康对照人群的外周血液样本,提取各组样本的全基因组DNA后,利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法分析上述差异表达基因中RAC2基因rs6572和rs1476002位点基因型,并通过测序验证分型结果。利用SPSS19.0软件对基因分型数据进行统计和分析。使用SHEsis软件进行连锁不平衡分析。结果:1.本论文发现GSM2133915和GSM2133916两组数据的差异表达基因共有1184个,其中慢性牙周炎组低表达基因415个,高表达基因769个。DAVID富集显示差异基因主要与免疫反应、炎性反应、细胞粘附、细胞凋亡、蛋白酶解、应激反应和骨系统发育等生物过程相关。2.进一步通过蛋白质组学研究方法比较健康人群和慢性牙周炎患者牙龈组织的蛋白质表达差异,发现有利于组织损伤修复的血清白蛋白在慢性牙周炎患者的牙龈组织中表达水平相对较低;与炎症反应相关的纤维蛋白原、膜联蛋白A2,与免疫反应相关的Ig G以及参与糖酵解的磷酸丙糖异构酶异构体1在慢性牙周炎患者的牙龈组织中表达水平相对较高。3.通过对RAC2基因rs6572和rs1476002位点各基因型、等位基因在健康人群和慢性牙周炎患者中的分布进行比较分析,发现RAC2基因rs6572和rs1476002位点在基因型和等位基因的分布上与慢性牙周炎的易感性均无相关性。按性别进行分层分析后发现,rs6572位点GG基因型与女性慢性牙周炎发病风险有一定的关联性(P=0.043,OR=2.554,95%CI=1.023-6.374);同时rs6572位点G等位基因是女性患慢性牙周炎的危险因素,发生慢性牙周炎的风险升高1.565倍(P=0.046,OR=1.565,95%CI=1.007-2.433)。结论:本论文结合慢性牙周炎患者和健康人群牙龈组织的差异表达基因和差异蛋白,初步发现慢性牙周炎发病的相关分子机制,并认为纤维蛋白原、A组膜联蛋白、磷酸丙糖异构酶、Ig G1、RAC2等差异表达分子可作为慢性牙周炎潜在的生物标记物;通过RAC2基因多态性与慢性牙周炎易感性的关联性分析,发现RAC2基因rs6572和rs1476002两个SNP位点与慢性牙周炎总体发病率无明显相关性,而RAC2基因rs6572位点多态性与慢性牙周炎发病风险存在性别差异,为筛选慢性牙周炎的生物标记物提供一定的数据资料。
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