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植物在生长发育的过程中会受到各种各样的逆境胁迫,产生对植物体有害的自由基。当下,通过分子生物学等技术手段从植物中分离抗逆基因,并转入到农作物中进行表达,是培育抗逆高产品种,提高作物产量的重要手段。超氧化物歧化酶(SOD)是清除植物体内活性氧的一种重要抗氧化酶类。研究发现,植物体内SOD酶活性的高低和植物的抗逆性密切相关,而且过表达SOD基因能明显提高植物对盐胁迫的抵御能力。本论文选取小麦烟农19为材料,采用RACE技术克隆出小麦FeSOD基因,并进行序列分析;构建原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并优化了诱导表达条件;用荧光定量PCR技术分析该基因在不同逆境胁迫下的表达差异。研究结果如下:1.通过简并引物扩增和RACE技术,克隆出小麦FeSOD基因。小麦FeSOD (GenBank注册号:JX398977)全长为1397bp,开放阅读框长594bp,推测编码197个氨基酸,分子量约为22.8KDa,等电点(PI)为5.382,其氨基酸序列与玉米、水稻等物种具有高度的同源性。2.根据获得FeSOD基因序列设计引物扩增编码区,并在引物上引入NotI和BamHI酶切位点。构建原核表达载体pETDuetl/FeSOD,并转化大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3)进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳检测发现蛋白条带大小与预期一致,Western Blot成功检测到重组蛋白,目的蛋白成功表达。通过优化IPTG浓度、诱导时间和诱导温度确定重组菌最佳诱导表达条件为0.5mmol/L的IPTG,诱导5小时,37℃。3.通过荧光定量技术,分析小麦FeSOD基因不同逆境胁迫下的表达差异。结果表明:在逆境胁迫下,FeSOD基因的表达量大体呈现先上升后下降的趋势。在37℃高温,4℃低温,不同的盐浓度,300mmol的盐,30%的PEG-6000和100μmol ABA胁迫下,FeSOD基因的表达量分别在3h、1h、200mmol、6h、48h和24h时最高,分别为对照的34倍、4.5倍、4.3倍、5.8倍、13.5倍和3.3倍,均达到显著水平。