BANCR调控EMT促进甲状腺乳头状癌侵袭转移的相关分子机制研究

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目的:探讨BRAF激活的长链非编码RNA(BANCR)在甲状腺乳头状癌和正常细胞中表达的差异和特点,分析BANCR调节上皮间充质转化(EMT)促进甲状腺乳头状癌侵袭和转移的作用及分子机制,从而揭示BANCR对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞生物学功能的影响。方法:1.使用siRNA对TPC-1细胞进行转染,分别构建BANCR低表达和过表达细胞株,将甲状腺乳头状癌TPC-1细胞株分为BANCR低表达组、BANCR低表达阴性对照组、BANCR过表达组和BANCR过表达阴性对照组。2.采用Transwell小室侵袭实验和细胞划痕实验观察甲状腺乳头状癌TPC-1细胞侵袭和迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡。并分析BANCR低表达组和BANCR过表达组之间细胞生物学行为的差异。3.运用蛋白免疫印迹实验(Western Blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测上皮间充质转化(EMT)相关分子(MMP-2、MMP-9、Snail、Vimentin、E-cadherin)表达量,研究BANCR表达的改变导致MMP-2、MMP-9、Snail、Vimentin、E-cadherin蛋白及其mRNA的变化情况,从而验证BANCR在蛋白水平和分子水平上对甲状腺乳头状癌的影响。结果:1.在Transwell小室侵袭实验和细胞划痕实验中,BANCR低表达组在侵袭性和转移性方面较BANCR过表达组强,然而,通过流式细胞术检测细胞凋亡,发现BANCR低表达组凋亡减慢。实验表明,低表达的BANCR可以促进癌细胞的侵袭和转移,并且阻止癌细胞凋亡。2.蛋白免疫印迹实验(Western Blot)检测发现Vimentin、Snail、MMP-2蛋白的表达为BANCR低表达组较过表达组高,而E-cadherin、MMP-9蛋白的表达则前者低于后者,其差异均有统计学意义。3.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验中MMP-2、Snail、Vimentin、MMP-9表达量为BANCR低表达组较过表达组高,而E-cadherin的表达量则前者低于后者,上述检测结果均有明显的统计学意义。实验表明,低表达的BANCR通过调控上皮间充质转化的相关分子发挥其作用。结论:低表达的BANCR可增强甲状腺乳头状癌的侵袭性和转移性,并且使其凋亡减慢,通过调节上皮间充质转化促进细胞的侵袭和转移。结果表明,BANCR表达的改变参与了甲状腺乳头状癌的发生和发展,为下一步靶向药物开发提供了研究方向。为提高甲状腺乳头状癌患者的生存率和改善患者的预后打下坚实的理论依据。
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