光敏剂TCMePyP的制备及对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞杀伤作用的研究

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目的:通过对H2TPyP(5,10,15,20-4(4-pyridine)porphyrin)进行修饰,制备得到TCMePyP(5,10,15,20-Tetrakis-(N-carboxymethyl-4-pyridinium)p orphyrin tetrabromide),研究TCMePyP的物理化学性质和光动力作用下对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的杀伤作用及机理。研究Q[7]-TCMePyP及Q[7]-anch ored-PAA负载TCMePyP光动力作用下对SH-SY5Y细胞的杀伤作用。方法:合成TCMePyP,利用二维核磁谱图表征及研究其动态激光散射光谱。测定H2TPy P及TCMePyP紫外-可见光吸收光谱和荧光光谱。使用SOSG(Singlet Oxygen S ensor Green)对其细胞外单线态氧进行检测。利用MTT比色法检测TCMePyP对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生存率的影响。激光共聚焦显微镜下观察其细胞内定位,检测细胞内光动力过程中产生ROS的变化。应用流式细胞术检测TCM ePyP-PDT诱导细胞凋亡。通过划痕实验检测TCMePyP在光动力作用下SH-SY5Y细胞的迁移运动与修复能力。MTT比色法检测TCMePyP、Q[7]-TCMePyP及Q[7]-anchored PAA负载TCMePyP,光动力作用下SH-SY5Y细胞的生存率的影响。激光共聚焦显微镜下观测TCMePyP、Q[7]-TCMePyP及Q[7]-anchored PAA负载TCMePyP在SH-SY5Y细胞内荧光量的变化。结果:二维核磁谱图表征TC MePyP结构。动态激光散射光谱表明,TCMePyP溶液表现出单峰分布,水合动力学直径显著减小。10μmol/L TCMePyP的紫外-可见吸收明显增加,λex=515nm时,TCMePyP荧光强度增大。525nm激光照射1×10-5 mol/L TCMePyP 11min时,单线态氧产生达最高。光照密度(10.48 mW/cm2),光照时间1min-9min,525nm、660nm激光的细胞光毒性极低(P>0.05);TCMePyP:2.5μmol/L-80μmol/L,SH-SY5Y细胞暗毒性极低(P>0.05)。525nm激光照射10μmol/L、50μmol/L TCMePyP,细胞生存率受到明显抑制,10μmol/L TCMePyP,细胞杀伤效果更强,细胞生存率随光照时间呈下降趋势。通过倒置显微镜观察到,随光照时间延长,细胞形态明显改变,坏死细胞逐渐增多。光动力作用24小时后流式细胞术检测到,TCMePyP-PDT下细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。在激光共聚焦显微镜下观察到,TCMePyP定位于SH-SY5Y细胞的胞质,进行光照后,定位于细胞核。TCMePyP光照3min及5min时,激光共聚焦显微镜检测:ROS产生明显增多(P<0.05)。划痕实验显示,TCMePyP-PDT明显抑制了SH-SY5Y细胞的迁移能力(P<0.05)。浓度5μmol/L,TCMePyP、Q[7]-TCMePyP和Q[7]-P AA-TCMePyP随光照时间的延长,细胞生存率呈降低趋势,Q[7]-PAA-TCMePy P组杀伤更明显(P<0.05)。525nm激光照射2min各浓度组Q[7]-PAA-TCMeP yP组较TCMePyP组及Q[7]-TCMePyP组而言,对SH-SY5Y细胞杀伤更明显(P<0.05)。共聚焦显微镜下测定到5μmol/LQ[7]-TCMePyP及Q[7]-PAA-TCMePy P可使SH-SY5Y细胞内的荧光增强。结论:与H2TPyP比较,TCMePyP的水溶性明显改善,可见光区吸收增强,发射荧光更强。光照条件下单线态氧产率较高、光毒性、暗毒性低、细胞定位明确。光动力处理后SH-SY5Y细胞杀伤更明显。瓜环Q[7]及瓜环Q[7]-anchored PAA纳米颗粒负载新型水溶性卟啉化合物(TC MePyP)后,均能使细胞内产生的荧光强度增大,对SH-SY5Y细胞的杀伤作用增强,表明瓜环及瓜环聚合物纳米颗粒具有药物载体的特征。
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