背景与目的:神经母细胞瘤是儿童常见的恶性肿瘤。不同神经母细胞瘤患者预后差别很大,低危型患者手术治疗可以取得不错的效果,但对于伴有癌基因MYCN扩增的高危型神经母细胞瘤患者,常规的治疗手段不仅无法延长生存期,还会导致强烈的毒性反应,所以急需一个更好的治疗方法。由于N-MYC的蛋白结构特殊,至今没有能够直接靶向N-MYC的药物。筛选和鉴定与癌基因MYCN存在协同致死效应的基因并干预其活性已成为间接抑制MYCN的理想替代途径。我们前期从FDA批准的药物库里筛选与MYCN形成协同致死的药物,发现蛋白酶体抑制剂硼替佐米可以与癌基因MYCN在神经母细胞瘤中协同致死。本文的研究目的在于确认硼替佐米对于肿瘤细胞的选择性杀伤作用,并探索其可能的分子机制,以期找到合适的药物联用策略用于治疗MYCN扩增型神经母细胞瘤。方法:通过Annexin V-FITC/PI双染料法,利用流式细胞仪检测硼替佐米对于肿瘤细胞凋亡水平的影响;利用DCFH-DA探针法检测肿瘤细胞内活性氧的水平;利用Real-Time PCR检测目的基因mRNA水平的变化;利用Western-Blot检测目的蛋白水平的变化;运用RNA干扰技术沉默目的基因。结果:研究发现硼替佐米不仅选择性杀伤MYCN扩增型神经母细胞瘤细胞,还特异性杀伤C-MYC依赖的伯基特淋巴瘤细胞,证明MYC高表达是细胞对硼替佐米作用敏感的一个重要分子标志。分子机制研究发现硼替佐米可以诱导神经母细胞瘤细胞内活性氧水平增加。通过沉默x-CT抑制抗氧化剂合成可以增强硼替佐米对神经母细胞瘤细胞的杀伤作用。同时,硼替佐米诱导促凋亡蛋白NOXA,TRIB3的表达,沉默NOXA和TRIB3可以挽救硼替佐米引起的细胞凋亡。沉默抗凋亡蛋白MCL1可以增强硼替佐米对肿瘤细胞的杀伤作用,并且MCL1抑制剂与硼替佐米在体外协同杀伤MYCN扩增型神经母细胞瘤细胞。结论:硼替佐米能够特异性杀伤MYC高表达的肿瘤细胞。其分子机制依赖于硼替佐米刺激细胞内活性氧的含量增加,同时诱导促凋亡蛋白NOXA、TRIB3的表达。硼替佐米与抗凋亡蛋白MCL1抑制剂联合用药可成为治疗MYCN扩增型神经母细胞瘤的潜在方案。