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植物典型的花器官发育包括形成萼片、花瓣、雄蕊、雌蕊四轮花器官,而柿子的花器官却是单性花,大多表现为雌花型,其雄蕊退化;仅有少数授粉品种具有雄花(如禅寺丸)。这与典型花器官发育的成花机理不尽相同。植物花器官发育过程中的大多数基因都属于MADS-box基因。本试验以雌花型柿子阳丰的花为试材,通过运用RT.PcR技术及RAcE法,克隆得到了一个与其花发育相关的MADS-box基因,并对其进行了表达分析。为进一步了解柿子花发育的分子机制、调控柿子的开花结实提供一定的理论依据。
其主要结果如下:(1)克隆得到了柿子花发育相关的MADS-box基因DkMADSl的cDNA全长,GenBank登录号为DQ412058。该基因包含起始密码子(ATG),终止密码子(TGA),全长1193bp,含有747 bp的开放阅读框,编码249个氨基酸的蛋白序列。分子量29 KD,等电点7.21,是一个中性蛋白。该蛋白具有完整的植物MADS--box蛋白的结构特征,包括保守的MADS区、半保守的K区、I区和C区。 (2)NCBI上经蛋白序列相似性分析,结果发现,该蛋白与AGL2亚族MADS-box基因具很高同源性,与矮牵牛的PMADS12和番茄的TM29分别具有72%和70%的同源性;系统进化聚类分析表明,该基因属于植物MIKC型AGL2亚族MADS-box基因。(3)RT-PCR表达分析表明,DkMADSI基因在柿予阳丰萼片、花瓣、子房及禅寺丸的雄蕊中均表达,而在叶片中不表达。 (4)Southem杂交结果表明,柿子基因组中存在DkMADSl基因,而且DkMADSl基因在柿子基因组中是单挎贝的。
本实验克隆得到的柿子花发育相关的MADS-box基因,包括保守的MADS区、半保守的K区、1区和C区,符合植物MADS-box基因的显著特征,则该基因应属于植物MADS-box基因家族成员。经同源性比对及系统进化树分析,将该基因预测的蛋白归类于AGL2亚族的MADS-box基因家族。前人研究发现,不同物种中AGL2亚族MADS-box基因的数目、表达部位、功能略有不同。如拟南芥中SEP1/2/3基因、番茄中的TM5/29基因等等。柿子中是否也存在DkMADSl基因的同源基因,DkMADSl基因是否可以单独,或和它的同源基因一起行使AGL2亚族MADS-box基因的作用,还有待于对其功能进行进一步研究。