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目的:
鼻腔鼻窦黏液过度分泌导致黏液生理特性改变,是慢性鼻-鼻窦炎黏膜炎症病理生理学特征之一。正常鼻腔鼻窦黏膜表面分泌的黏液有两层,内层为浆液即溶胶层,纤毛在此层中可自由摆动;外层为黏液即凝胶层,是上皮纤毛摆动传输的载体。而黏液凝胶样特性的改变影响着黏液纤毛清除功能。近年发现黏蛋白(mucin)是影响黏液凝胶样特性的重要因素。本课题研究黏蛋白在正常筛窦黏膜和慢性鼻一鼻窦炎黏膜炎症反应中的表达和意义,并进一步探讨黏蛋白mRNA在人鼻黏膜上皮细胞中的表达机制。
方法:
1 黏蛋白在慢性鼻-鼻窦炎炎性黏膜中表达的研究通过应用免疫组化检测黏蛋白MUC2、MUC5B和MUC5AC在7例正常对照组筛窦黏膜和32例慢性鼻-鼻窦炎筛窦黏膜蛋白水平的表达,采用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)及荧光定量逆转录巢式PCR(FQ-RT-NP-PCR)检测正常7例对照组筛窦黏膜和32例慢性鼻一鼻窦炎筛窦黏膜中MUC2、MUC5B和MUC5ACmRNA的定量表达。并探讨其在慢性鼻-鼻窦炎中的意义。
2 IL-1β上调人鼻黏膜上皮细胞黏蛋白rnRNA表达的研究在培养的第二代人鼻黏膜上皮细胞加入IL-1β(10ng/m1)刺激24小时后,采用荧光定量RT-PCR(FQ-RT-PCR)及荧光定量逆转录巢式PCR(FQ-RT-NP-PCR)检测人鼻黏膜上皮细胞中MUC2、MUC5B和Muc5ACmRNA的定量表达。
3 白三烯受体拮抗剂抑制人鼻黏膜上皮细胞黏蛋白mRNA表达的研究在培养的第二代人鼻黏膜上皮细胞分别加入IL-1β(10ng/ml)、白三烯受体拮抗剂(10<-5>M/ml)及在IL-1β(10ng/ml)刺激前的8小时先加入白三烯受体拮抗剂(10<-5>M/ml)孵育, 24小时后采用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)及荧光定量逆转录巢式PCR(FQ-RT-NP-PCR)检测人鼻黏膜上皮细胞中MUC2、MUC5B和MUC5ACmRNA的定量表达。
结果:
1 免疫组织化学染色证实MUC2、MUC5B和MUC5AC在正常筛窦黏膜及CRS的筛窦黏膜组织中均有表达。在CRS中MUC2、MUC5B和MUC5AC阳性表达于筛窦黏膜上皮细胞,且以杯状细胞为主;MUC2和MUC5AC未表达黏膜下腺体,而MUC5B表达于CRS筛窦黏膜的部分黏膜下腺体。在正常对照组中,MUC2、MUC5B和MUC5AC弱阳性表达于筛窦黏膜上皮细胞,且以杯状细胞为主;MUC2、MUC5B和MUC5AC未表达于黏膜下腺体。MUC2在正常对照组的筛窦黏膜表达的平均灰度值为174.52±5.71,在CRS的筛窦黏膜表达的平均灰度值为135.86±20.11。MUC2在CRS的筛窦黏膜中的阳性表达高于正常对照组的筛窦黏膜,两者差异有统计学意义(P<0.01)。MUC5B在正常对照组的筛窦黏膜表达的平均灰度值为172.67±12.73,在CRS的筛窦黏膜表达的平均灰度值为143.01±22.50。MUC5B在CRS的筛窦黏膜中的阳性表达高于正常对照组的筛窦黏膜,两者差异有统计学意义(P<0.01)。MUC5AC在正常对照组的筛窦黏膜表达的平均灰度值为159.72±14.14,在CRS的筛窦黏膜表达的平均灰度值为115.80±31.58。MUC5AC在CRS的筛窦黏膜中的阳性表达高于正常对照组的筛窦黏膜,两者差异有统计学意义(P<0.01)。
MUC2、MUC5B和MUC5ACmRNA在CRS和正常对照组中都有表达,在CRS筛窦黏膜中MUC2mRNA的表达为(10.55±3.91)×10<4>拷贝/μg,MUC5BmRNA为(18.80±15.68)×10<5>拷贝/μg,MUC5ACmRNA为(35.80±19.74)×10<5>拷贝/μg,在正常筛窦黏膜中MUC2mRNA的表达为(1.36±0.46)×10<4>拷贝/μg,MUC5BmRNA为(1.49±0.46)×10<5>拷贝/μg,MUC5ACmRNA为(4.66±2.47)×10<5>拷贝/μg,MUC2、MUC5B和MUC5ACmRNA在CRS筛窦黏膜中的表达比正常对照组增高,两组之间的差异具有统计学意义(P<0.01)。
2 在培养的鼻黏膜上皮绌胞上均检测到MUC2、MUC5B和MUC5ACmNA的表达,IL-1β刺激组MUC2mRNA定量表达[(39.26±6.10)×10<4>拷贝/μg]高于对照组[(5.70±4.16)×10<4>]拷贝/μg],差异具有统计学意义(P<0.01)。IL-1β刺激组MUC5BmRNA和MUC5ACmRNA定量表达[(5.72±2.06)×10<5>拷贝/μg,(4.60±1.89)×10<8>拷贝/μg]均高于对照组[(1.11±0.72)×10<5>拷贝/μg, (2.50±1.40)×10<7>拷贝/μg],差异具有统计学意义(P<0.05)。
3 MUC2mRNA在对照组为(2.93±1.57)×10<6>拷贝/μg,白三烯受体拮抗剂组为(1.63±0.47)×10<6>拷贝/μg,IL-1β组为(6.63±1.73)×10<6>拷贝/μg,白三烯受体拮抗剂+IL-1β组为(3.48±1.41)×10<6>拷贝/μg。4组进行方差分析,4组中MUC2mRNA定量表达差异有统计学意义(P<0.01)。白三烯受体拮抗剂+IL-1β组MUC2mRNA定量表达低于IL-1β组,差异有统计学意义(P<0.01)。白三烯受体拮抗剂组和对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
MUC5BmRNA在对照组为(8.21±3.54)×10<5>拷贝/μg,白三烯受体拮抗剂组为(5.15±2.16)×10<5>拷贝/μg,IL-1β组为(3.40±2.79)×10<7>拷贝/μg,白三烯受体拮抗剂+IL-1β组为(1.75±0.69)×10<6>拷贝/μg。4组进行方差分析, 4组中MUC5BmRNA定量表达差异有统计学意义(P<0.01)。白三烯受体拮抗剂+IL-1β组MUC5BmRNA定量表达低于IL-1β组,差异有统计学意义(P<0.05)。白三烯受体拮抗剂组和对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
MUC5ACmRNA在对照组为(4.32±2.53)×10<6>拷贝/μg,白三烯受体拮抗剂组为(2.96±2.17)×10<6>拷贝/μg,IL-1β组为(3.90±1.79)×10<7>拷贝/μg,白三烯受体拮抗剂+IL-1β组为(5.13±2.47)×10<6>拷贝/μg。4组进行方差分析,4组中MUC5ACmRNA定量表达差异有统计学意义(P<0.01)。白三烯受体拮抗剂+IL-1β组MLIC5ACmRNA定量表达低于IL-1β组,差异有统计学意义(P<0.01)。白三烯受体拮抗剂组和对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:
1 黏蛋白MUC2、MUC5B和MUC5AC在CRS中表达增高,可能是CRS黏液过度分泌的重要因素。
2 鼻黏膜上皮细胞IL-1β组中MUC2、MUC5B和MUC5ACmRNA表达均高于对照组,提示IL-1β上调鼻黏膜上皮细胞黏蛋白mRNA的表达。
3 白三烯受体拮抗剂降低IL-1β诱导的鼻黏膜上皮细胞黏蛋白mRNA的表达水平,但不影响正常状态鼻黏膜上皮细胞黏蛋白mRNA的表达,提示白三烯受体拮抗剂可能对炎性细胞因子诱导的鼻黏膜上皮细胞黏蛋白mRNA的表达有抑制作用。