【摘 要】
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[目的]导致胰岛移植失败的主要原因是移植的胰岛质量差，数量少。技术的进步和高质量胶原酶的应用，使大规模胰岛分离成为可能。但即使如此，胰岛的产量仍然很低，影响胰岛产量的两个
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[目的]导致胰岛移植失败的主要原因是移植的胰岛质量差，数量少。技术的进步和高质量胶原酶的应用，使大规模胰岛分离成为可能。但即使如此，胰岛的产量仍然很低，影响胰岛产量的两个最受关注的问题是：1、减少胰岛在热胶原酶中暴露的时间；2、尽量避免消化过程中胶状物的形成。本实验就是要探讨一种高效大鼠胰岛分离纯化方法，并研究纯化后的胰岛组织在体内外环境中的基本生物学功能状况。 [方法] 1、以低浓度胶原酶消化及机械性吹打获取初步分离的胰腺碎片来进行短期培养。2、在消化过程消化液PH值保持在7.8±0.1，温度在38.0±1℃，同时胶原酶溶液中加入5％(V／V)的甘油，以减少消化过程中胶状物的出现。3、终止消化液和洗涤液改用加入1.0mg／ml牛血清蛋白的RPMI1640以减轻对胰岛的损伤。体外胰岛素刺激实验、异种移植实验检测胰岛分离纯化后的基本生物学功能。 [结果] 热缺血时间13±3min，冷缺血时间10±0.5min，38℃水浴震荡消化120次／分，用时15-20分钟，以≥50um为阳性计数，数据结果如下：消化后胰岛计数为1680±170个／只，histopaque1077纯化后平均可收获870∽1300个／只。回收率(61.2±13.3)％，细胞成活率(83.7％±3.25％)，纯度(80±3.5)％。在16.7mmol／L葡萄糖或16.7mmol／L葡萄糖+10mmol／L的茶碱的刺激与5.5mmol／L的葡萄糖刺激相比，胰岛素释放量升高2—3倍。纯化后的胰岛异种移植可逆转实验性糖尿病ICR小鼠高血糖7.5±1天。 [结论] 实验证实此方法是一种简单，高效的胰岛分离方法，具有耗
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