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辽宁省西瓜、甜瓜种植基地的瓜类细菌性果斑病每年都在不同程度发生且病情不断蔓延。本研究采用血清学及分子生物学技术对其病原菌的生物学特性进行了研究,同时针对西瓜上常发生的两种检疫性有害生物Acidovorax citrulli和CGMMV创建了多重RT-PCR检测技术,另外研究了纳米级铜制剂对Acidovorax citrulli的抑菌作用和机制,主要研究结果如下:1.本研究从辽宁省凌海市右卫镇发病西瓜果实上、三台子镇发病甜瓜果实上和翠岩镇发病甜瓜果实上,分别分离纯化得到了11个、7个和9个菌株,运用柯赫氏法则验证均为其致病菌。选取右卫镇西瓜果实上的菌株JZ17、三台子镇甜瓜果实上的菌株JZX2和翠岩镇甜瓜果实上的菌株JZT8,作为代表性菌株进行深入研究。培养性状及生物学特性研究表明,3个菌株与阳性菌株AAC00-1表现一致;采用DAS-ELISA进行血清学方法鉴定,3个菌株均呈阳性反应;ITS序列分析表明,3个菌株的ITS序列与西瓜噬酸菌各菌株ITS序列的同源性均高达99%以上,综上可以明确地将菌株JZ17、JZX2和JZT8鉴定为西瓜噬酸菌（Acidovorax citrulli）。2.利用特异性引物PL1/PL2对3个菌株进行亚群鉴定,结果表明菌株JZ17为西瓜噬酸菌亚群II型菌株,菌株JZX2和JZT8为I型菌株。为了比较3个菌株的亲缘关系,采用引物27F/1492R对3个菌株的16S rDNA序列进行扩增,获得了目的片段,在GenBank中进行同源性比对,结果表明,菌株JZ17、JZX2、JZT8与A.citrulli各菌株16S rDNA的相似性均达99%以上。利用Neighbor-Joining法构建的系统发育进化树表明,菌株JZX2、JZT8与其它Acidovorax citrulli菌株处于同一分支,菌株JZ17与江西地区菌株JXZS6亲缘关系较近。3.西瓜噬酸菌（A.citrulli）引起的瓜类细菌性果斑病和黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）引起的西瓜血瓤病,是西瓜上的两种重要检疫性病害,对全球西瓜产业造成严重损失,两种病害在辽宁省时有发生。本研究建立了同时检测西瓜上A.citrulli和CGMMV两种病原的多重RT-PCR检测技术体系。根据CGMMV基因组和A.citrulli的内转录间隔区ITS序列以及西瓜延伸因子-1α（EF-1α）的基因序列,设计并筛选出3对特异性引物,最终确立多重RT-PCR的优化条件。A.citrulli ITS,CGMMV和西瓜EF-1α的引物浓度分别为0.1、0.1、0.2μM,反应程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,54℃退火30 s,72℃延伸45 s,35个循环,72℃延伸10 min。该技术体系可以检测到稀释至10-4倍的原模板浓度,可分别在A.citrulli或CGMMV单独侵染的西瓜叶片中扩增出2条目的片段,而测试的其他病毒或细菌侵染的西瓜叶片只能扩增出EF-1α的条带,表明该检测体系灵敏度高、特异性强。本研究通过田间采集样品,采用多重RT-PCR检测技术及单一RT-PCR检测技术进一步验证了该方法的有效性;另外运用该检测技术对辽宁省各地184个种子样品进行A.citrulli和CGMMV检测,检测结果上报给辽宁省植保植检站,对辽宁省种子、种苗的监测检疫提供了指导作用。4.采用本研究室制备的纳米级氢氧化铜、纳米级碱式硫酸铜和工业级碱式硫酸铜,通过定性和定量试验,研究了3种铜制剂对A.citrulli的抑菌活性,从细胞水平、生理生化水平和分子水平研究了其对西瓜噬酸菌的抑菌机制。采用平板扩散法及比浊法测定纳米级铜制剂对果斑病菌的抑菌活性,结果表明3种铜制剂在较小浓度下均对果斑病菌有很好的抑菌效果,抑菌率随处理药剂浓度提高而显著增强,且纳米氢氧化铜的抑菌效果大于纳米级碱式硫酸铜的2倍,超过工业级碱式硫酸铜的3倍。采用二倍稀释法求得纳米氢氧化铜制剂的MIC为0.625μg/mL,MBC为5μg/mL。纳米级碱式硫酸铜及工业碱式硫酸铜处理病菌的MIC值分别为1.33和1.55μg/mL,两者的MBC值一致,为10μg/mL。综上抑菌活性测定,纳米级铜制剂分散性、稳定性强,可以有效抑制菌株正常生长,低浓度处理即可有效杀死病原菌。为了明确纳米级铜制剂对果斑病菌的抑菌机制,采用扫描电镜观察纳米级铜制剂处理后病菌的菌体形态,结果表明3种铜制剂对菌体的破损现象明显,都可使菌体出现孔洞、扭曲变形,纳米级氢氧化铜效果强于纳米级碱式硫酸铜,强于工业级碱式硫酸铜制剂。3种药剂处理果斑病菌后,菌体培养液中乳酸脱氢酶活性为零,表明该制剂不能改变细胞膜通透性。DNA降解试验结果表明纳米级氢氧化铜不能降解果斑病菌DNA,而碱式硫酸铜可很好地降解果斑病菌DNA,处理25分钟后DNA已开始降解,且纳米级碱式硫酸铜作用效果更强,起效时间更短。综上试验结果表明,纳米级氢氧化铜和纳米级碱式硫酸铜均可通过破坏菌体形态,使菌体出现孔洞、扭曲变形,纳米级碱式硫酸铜制剂还可以有效降解菌体基因组DNA达到抑菌作用。