水稻VOZ1基因的克隆与功能分析

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Ca2+,是一个十分重要的第二信使,作为一个耦合刺激响应的调节因子,调控细胞的多种生理和生化反应。通过测定植物细胞内Ca2+峰值的变化可以监测植物对各种刺激的响应。钙调素(calmodulin,CaM)作为一个普遍而高度保守的钙离子受体蛋白,是具有EF手的EF手型家族蛋白。CaM本身并无酶活性,需要借助钙调素结合结构域(CaMBD)与CaMBP发生相互作用。广义的钙调素结合蛋白(CaMBP)指能与CaM结合的所有蛋白质,其中包括已经确定其活性直接受CaM调控的各种酶类以及体内或者体外条件下能与CaM结合的蛋白。该蛋白广泛的存在于植物和动物细胞中,对植物的生长发育和逆境应答发挥着重要的作用。NAC是转录因子家族中的一员,它由NAM、ATAF以及CUC等基因组成,它不但与植物的发育相关,还与生物和非生物胁迫相关。VOZ(Vascular plant One-Zinc finger)即维管植物的锌指蛋白,它是NAC家族NAM亚家族的一个成员,研究水稻中VOZ基因的功能意义重大。本研究室利用酵母双杂交技术在水稻低温和干旱的cDNA文库中筛选出多个与OsCaMBP相互作用的蛋白。本研究选取其中的一个蛋白OsVOZl进行其功能的研究与探索,为进一步的完善水稻中Ca2+介导的逆境信号网络提供依据。主要的研究结果如下:1.对OsVOZl进行生物信息学分析发现,该基因开放阅读框1290 bp,编码429个氨基酸残基,等电点为4.88,预测分子量为48.11KD。蛋白质功能预测发现140-163位氨基酸有一个锌指结构域,第211-304位有NAM结构域。因此,该基因属于NAC家族。2.运用半定量RT-PCR分析OsVOZ1在不同逆境下在不同组织和器官中的表达量,发现OsVOZ1基因在根、茎、叶中均有不同程度的表达,而且该基因受多种逆境的诱导,说明该基因属于多种逆境均可诱导的基因(简称:多逆境诱导基因,MSI)。3.获得OsVOZ1转基因纯合植株,并对其进行部分逆境处理实验,发现超表达株系增强了对盐胁迫的抗性。4.亚细胞定位证实OsVOZ1基因定位于细胞质中,而相关的报道称其在细胞核中发挥作用,推测其可能结合核外穿梭蛋白,然后通过一定的转运通道转移至细胞核发挥作用。5.通过大肠杆菌表达系统,成功的制备和纯化了OsVOZl的融合蛋白,以用于与OsCaMBP相互作用的进一步验证。
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