论文部分内容阅读
目的:癫痫是一种严重威胁人类健康的神经系统疾病,其中药物难治性癫痫病因复杂、诊断过程冗长,是目前医学领域面临的一个重大难题。MicroRNA在人类疾病的分子诊断中拥有巨大的潜能,对于难治性癫痫,如果能够找到某种特异性表达的miRNA作为该病诊断的生物标记物,将对难治性癫痫的早期诊断产生重要的意义。本实验先以难治性癫痫患者致痫脑组织为研究对象,初步验证miRNA-134-5p在难治性癫痫患者致痫脑组织中表达是否上调,然后以氯化锂-匹罗卡品诱导的大鼠癫痫模型为研究对象,检测其血清和海马组织中miRNA-134-5p的表达情况,为人血清miRNA-134-5p作为诊断难治性癫痫的生物标记物的研究及miRNA-134-5p在癫痫方面的进一步临床研究提供重要依据。方法:本实验分两部分。第一部分:随机挑选15例于我科治疗的难治性癫痫患者,其术中切除的术后病理诊断为局灶性皮质发育不良(FCD)的致痫脑组织为实验组;随机挑选15例于我科急诊的高血压脑出血患者,急诊行开颅内血肿清除术皮质造瘘时所取的非功能区健康皮层脑组织为对照组(患者既往无中枢神经系统疾病史,术后所取脑组织病理检查正常)。应用实时定量PCR(RT-qPCR)检测两组样本中miRNA-134-5p的表达水平。第二部分:以氯化锂-匹罗卡品建立大鼠颞叶癫痫模型,将达到癫痫持续状态(SE)并成活的大鼠随机分为3个时间组:1周组(SE后1周)、2周组(SE后2周)、2个月组(SE后2个月),每组10只。另将生理盐水对照组和未发作组大鼠随机分配至上述3个时间组中,每组分别10只。分别于SE后1周、2周、2个月时,将各时间点的致痫鼠、正常鼠、未发作鼠麻醉后取血清和大脑海马组织,应用RT-qPCR检测各组样本血清和海马中miRNA-134-5p的表达水平。结果:(1)与正常脑组织相比,miR-134-5p在难治性癫痫患者致痫脑组织中表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)在大鼠癫痫持续状态后1周、2周、2个月时,与对照组和未发作组相比,miR-134-5p在致痫组大鼠海马组织中均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);在对照组和未发作组之间,miR-134-5p表达水平无统计学差异。(3)在癫痫持续状态后第1周,与对照组相比,血清miR-134-5p在致痫组大鼠中升高,差异有统计学意义(p=0.0288),但与未发作组相比,差异无统计学意义(p=0.0630);在癫痫持续状态后第2周,与正常对照组和未发作组相比,血清miR-134-5p在致痫组大鼠中均升高,差异有统计学意义(分别为p=0.0185,p=0.0232);在癫痫持续状态后第2个月,与正常对照组和未发作组相比,血清miR-134-5p在致痫组大鼠中均显著升高,差异有统计学意义(均为p<0.001);在上述3个时期的3组致痫组中,与癫痫持续状态后第1周、第2周相比,血清miR-134-5p在第2个月时显著升高,差异有统计学意义(均为p<0.001);在上述3个时期,血清miR-134-5p在对照组和未发作组间无统计学差异。结论:(1)本实验第一部分表明,与正常皮层脑组织相比,miRNA-134-5p在难治性癫痫患者致痫皮层脑组织中表达升高,提示miRNA-134-5p可能参与了癫痫的发生和发展及难治性癫痫的形成。(2)本实验第二部分表明,癫痫持续状态后1周、2周、2个月时,与对照组和未发作组相比,miR-134-5p在癫痫大鼠海马组织中均明显升高。在急性期(SE后1周、2周),与对照组和未发作组相比,致痫组大鼠血清miR-134-5p升高不明显;在慢性期(SE后2个月),致痫组大鼠血清miR-134-5p则明显升高。癫痫是一种慢性疾病,动物癫痫模型中慢性期miRNA的改变更有意义,所以本实验结果表明,动物模型中海马及血清miR-134-5p表达水平的升高,提示miR-134-5p很可能参与了致痫组大鼠反复发生自发性癫痫发作的内在机制,而且血清中miR-134-5p表达水平的升高具有诊断意义。(3)上述结果提示:miR-134-5p与难治性癫痫有重要的关联,人血清miRNA-134-5p作为诊断难治性癫痫的生物标记物的可行性有重要的研究价值,本实验为延伸miRNA-134-5p在难治性癫痫中的进一步临床研究提供重要依据。