miR-3162-3p mimic诱导OVA致敏小鼠炎症反应的作用研究

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【目的】  本课题组在前期的临床研究及动物实验基础上发现 miR-3162-3p在哮喘患者体内及急性哮喘小鼠体内均特异性上调,并证实了miR-3162-3p可靶向结合在CTNNB1-mRNA3’ UTR区域,降低miR-3162-3p的靶基因CTNNB1和CTNNB1编码的蛋白β-catenin的表达。为了进一步研究miR-3162-3p的生物学功能,本实验在未致敏和OVA致敏小鼠模型上腹腔注射miR-3162-3p mimic(人工合成的核酸类似物),探讨miR-3162-3p mimic在未致敏和致敏小鼠炎症反应的作用。  【方法】  1.采用16只 SPF级 BALB/c小鼠(20±2g),第0,1,2天注射药物,根据是否腹腔注射miR-3162-3p mimic及其注射药物浓度不同,分为对照组(腹腔注射5%葡萄糖)、2mg/kg组(miR-3162-3p mimic2mg/kg)、4mg/kg组和8mg/kg组。采用 qRT-PCR技术检测肺组织miR-3162-3p的表达水平,HE染色鉴定肺组织中炎症细胞浸润程度,瑞氏染色对肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞分类计数,ELISA检测测肺组织炎症因子表达。  2.采用24只 SPF级 BALB/c小鼠(20±2g),第0,7,14天进行OVA腹腔致敏,第21,22,23天进行腹腔注射药物处理。根据是否腹腔致敏和腹腔注射miR-3162-3p mimic,分为对照组、未致敏+miR-3162-3p mimic4mg/kg组(以下简称未致敏+mimic组)、致敏组、致敏+mimic组。取材后,通过qRT-PCR、ELISA及肺泡灌洗液细胞分类等技术,进一步探讨miR-3162-3p mimic对致敏小鼠肺部炎症的影响。  【结果】  1.对未致敏小鼠腹腔注射不同浓度的miR-3162-3p mimic结果显示:①腹腔注射miR-3162-3p mimic浓度越高,BALF细胞总数相应地增高(P<0.01),但各组的细胞分类没有区别;②随着腹腔注射miR-3162-3p mimic浓度的增高, qRT-PCR测得肺组织miR-3162-3p的表达水平也相应增高(P<0.01),但CTNNB1表达水平各组没有区别;③ ELISA结果显示:4mg/kg和8mg/kg组肺匀浆IL-4及TGF-β1表达水平分别较对照组及2mg/kg组增高,具有统计学差异(P<0.01);④肺组织病理切片HE染色显示:随着腹腔注射miR-3162-3p mimic浓度增高,肺组织炎症细胞浸润也相应增高。  2.对OVA致敏小鼠腹腔注射miR-3162-3p mimic结果显示:① qRT-PCR技术显示:未致敏+mimic组和致敏+mimic组miR-3162-3p的表达水平较对照组、致敏组明显增高(P<0.001)。未致敏+mimic组和致敏+mimic组的CTNNB1的表达水平较对照组及致敏组降低(P<0.05);②未致敏+mimic组和致敏+mimic组BALF细胞总数较对照组及致敏组增高(P<0.05),未致敏+mimic组和致敏+mimic组细胞分类以巨噬细胞为主(P<0.05);③ ELISA结果显示:未致敏+mimic组和致敏+mimic组肺匀浆IL-4表达水平较对照组及致敏组增高(P<0.001);④肺组织病理切片显示:未致敏+mimic组和致敏+mimic组肺组织炎症细胞浸润水平较对照组增高。  【结论】  腹腔注射miR-3162-3p mimic浓度越高,未致敏小鼠肺部炎症反应越明显,但各组的CTNNB1的表达水平各组没有区别;在致敏小鼠模型上,致敏可介导CTNNB1的表达,另一方面,miR-3162-3p mimic可下调小鼠肺组织CTNNB1表达水平。
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