多维液相色谱-质谱联用技术在蛋白质组学中的应用

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由于血浆中蛋白质的种类繁多,各组分含量的动态分布范围很大,采用二维液相色谱对人血浆样品首先进行蛋白质水平上的分级,收集到的组分分别酶解后再利用毛细管液相色谱—电喷雾—串连质谱分析,在人类蛋白质组学组织(HUPO)建议的较为严格的数据库搜索标准下,成功鉴定到了1292种蛋白质,有效避免了常规方法中去除高丰度蛋白质给血浆中低丰度蛋白质所带来的损失,从而大大提高了鉴定到的蛋白质的数量。 采用固定化金属亲和色谱对小鼠肝组织蛋白质酶解所产生肽段进行亲和纯化,富集到了大量的磷酸化肽段,之后利用纳升级毛细管液质联用系统进行分析,成功鉴定到了26段小鼠肝组织的磷酸化肽段的26个磷酸化位点,并对磷酸化肽段的质谱行为做了分类总结。建立了对组织样品进行磷酸化蛋白质分析的方法。 充分利用了磷酸化肽段在聚苯乙烯类色谱柱上不保留或保留很弱以及磷酸化肽段在碱性条件下通常带有较多负电荷的特点,采用新型一体柱在碱性条件下上样和pH台阶梯度洗脱,有效富集了小鼠肝组织酶解肽段中的磷酸化肽段。通过对收集到的酸性洗脱液中肽段的质谱分析,成功鉴定了31组蛋白质的37段磷酸化肽,确定了46个磷酸化位点。 通过改变聚合单体的比例和添加新的致孔剂,快速制备出了聚苯乙烯类毛细管电色谱整体柱,并成功分离了苯的同系物、苯胺、荷尔蒙、碱性药物、肽段以及小肽的同分异构体,最高柱效超过20,000N/m。
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