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本文建立了啤酒酵母RAPD的扩增体系,通过RAPD分子标记比较研究了不同啤酒酵母菌株的遗传多样性以及遗传相似性,并利用RAPD对2株发酵性能良好的啤酒酵母菌株进行了标记。
利用啤酒酵母种特异性引物SC-1和SC-2对22株酵母基因组DNA进行扩增,已知的8株啤酒酵母均出现1170bp左右的特征谱带,未知其种属来源的14株酵母分离株中有7株也出现了1170bp特征谱带,属于啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)。
对啤酒酵母RAPD扩增体系进行了优化,得出啤酒酵母RAPD扩增采用模板50ng,2.5mMMg2+,Taq酶1.5U,200μMdNTPs,25pmol随机引物,反应总体积为25μL和93℃2min,36℃1min,72℃2min1次循环;93℃1min,36℃1min72℃2min,40次循环;93℃1min,36℃1min,72℃10min1次循环的PCR扩增程序能够得到比较良好的RAPD电泳图谱并具有良好的重复性。
采用RAPD对15株不同来源的啤酒酵母进行了分子标记和系统学研究,在50条随机引物中筛选到P07、09、11、21和42计5条随机引物具有较好的扩增多态性。共检测到49个位点,其中46个为多态标记,并获得了清晰稳定DNA图谱,显示出不同来源的15株啤酒酵母菌株之间存在着较大的种内遗传多态性,根据菌株之间的遗传相似系数和距离可以分成不同的类群,显示出不同的亲缘关系。通过发酵试验发现这些菌株的代谢产物双乙酰和高级醇的含量,双乙酰的还原速度存在较大的差异。同时发现菌株YZU-APK和TZ-02在发酵第4天时双乙酰出现峰值,在第14天就降低到0.1mg.L-1以下,还原速度快,并且发酵结束时高级醇含量分别达到66mg.L-1和78mg.L-1左右,具有良好的发酵性能。
分析随机引物P21和P42RAPD扩增图谱,找到了菌株YZU-APK和TZ-02区别于其他啤酒酵母的DNA分子标记MP42-380、MP21-440、MP21-1330和MP21-1900。