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目的:探讨骨活素(Osteoactivin,OA/GPNMB)和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)过表达对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。 方法:1.原代分离大鼠骨髓间充质干细胞并体外培养;2.腺病毒感染预实验:在6孔培养板中加入不同感染复数(MOI值)的对照腺病毒,感染24h后放在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光的表达情况;3、MTT法测定腺病毒对骨髓间充质干细胞的影响;4.将骨髓间充质干细胞分成:空白组(细胞正常培养),阴性对照组(细胞内感染对照腺病毒),实验组(a.细胞内感染BMP-2过表达腺病毒,b.细胞内感染OA过表达腺病毒),在成骨诱导培养21天时收集各组细胞,通过real-timePCR及Western-Blot分别检测BMP-2、OA在基因及蛋白水平上的表达情况;5.将骨髓间充质干细胞分成A、B、C、D四组,分别给予对照腺病毒感染、OA过表达腺病毒感染、BMP-2过表达腺病毒感染、OA和BMP-2过表达腺病毒共感染,分别在成骨诱导液中培养0天、7天、14天、21天,收集各组中各个时间点的细胞,通过real-timePCR及Western-Blot分别检测BMP-2、OA、Smad1及RUNX2四种成骨相关因子在基因与蛋白水平的表达情况,并在21天时各组行茜素红染色成骨鉴定。 结果:1、骨髓间充质干细胞在体外生长良好,细胞数足量;2、骨髓间充质干细胞感染对照腺病毒后,绿色荧光表达量随腺病毒的MOI值的变化而不同,当MOI值为100时,镜下荧光表达效果最佳;3.MTT法测定腺病毒对骨髓间充质干细胞的生长无明显的抑制作用;4、感染过表达腺病毒后骨髓间充质干细胞中OA和BMP-2本身在基因和蛋白水平的表达量明显增高;所有检测因子在各组中基因与蛋白的表达量均与时间近似成正相关, P<0.05,差异有统计学意义;5、所有检测因子在各个时间点上的基因与蛋白表达量均高于对照组(A组:对照腺病毒组), P<0.05,差异有统计学意义;6、第21天各组细胞茜素红染色均为阳性,且实验组明显高于对照组(A组:对照腺病毒组),实验组中D组(共感染组)效果最佳。 结论:在骨髓间充质干细胞中过表达OA和BMP-2,可促进细胞向成骨方向分化,并且两者同时过表达时促进细胞成骨分化的能力更强。