目的 神经系统的损伤常常造成神经元不可逆的死亡,由此引起的神经功能丧失一直是困扰神经病学家的难题。近来干细胞被应用于神经损伤后的组织修复与功能重建,为这一难题的解决提供了新的思路。研究表明MSCs(Marrow mesenchymal stem cells,骨髓间充质干细胞)具有取材方便、容易分离获取、适宜条件下可以跨胚层分化、移植免疫排斥弱等特点,成为神经细胞移植治疗研究中最活跃的领域,已经在动物实验中取得良好疗效。在这一过程中,免疫系统处于何种地位,其对干细胞移植后分化、增殖、神经营养等生物学行为有何影响等问题尚无明确答案。小胶质细胞被认为是中枢神经系统中最有代表性的免疫细胞,在不同环境下小胶质细胞可以分泌神经营养因子或神经毒性因子,对损伤神经细胞的修复或死亡起直接的促进作用,在脑缺血、帕金森氏病、阿尔茨海默病等多种中枢神经系统病变中发挥损伤和修复的双重作用。本研究以小胶质细胞为切入点,重点考察其在神经损伤的微环境中对MSCs的增殖、分化、神经营养等多种生物学行为的影响并对在此环境下MSCs内部的信号传导通路进行初步研究。 实验材料与方法 1、采用原代细胞培养进行MSCs的培养,采用细胞株传代法培养PC12和BV2,分别替代神经细胞和小胶质细胞。 2、以孔板培养皿和相应尺寸的转移筛网建立两种细胞的共育培养系统。转移筛网孔径8μm,能允许转移筛网内外的大分子蛋白和液体交流,但不允许细胞通过。共育结束后移走转移筛网及其上细胞,对培养皿上的细胞进行单独检测。 3、采用免疫荧光染色法对培养的MSCs进行鉴定,进行CD44、NSE染