多因素联合基因治疗对H22实体瘤生长抑制作用的初步探讨

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目的:本文拟采用pcDNA3.1-IFN-β、pcDNA3.1-TNF-α、pcDNA3.1-CXCL-1和pcDNA3.1-CH510治疗质粒转染小鼠H22细胞,探讨不同浓度,不同组合的治疗方案对H22实体瘤生长的抑制作用,寻求治疗H22实体瘤的最佳治疗方案。方法:(1)以H22肝癌细胞接种于BALB/c小鼠右后腿肌肉内,建立实验性小鼠肿瘤模型。(2)采用裸质粒DNA原位注射法让质粒pcDNA3.1-IFN-β、pcDNA3.1-TNF-α、pcDNA3.1-CXCL-1和pcDNA3.1-CH510在肿瘤原位表达相应的产物IFN-β、TNF-α、CXCL-1、CH50。(3)采用裸质粒DNA尾静脉注射法实现荷瘤鼠肝内转染质粒pcDNA3.1-IFN-β进行基因治疗。(4)通过比较肿瘤瘤重观察不同组别治疗方案的效果。(5)评估出各种基因的最适浓度后,将各种基因进行联合治疗荷瘤小鼠,观察联合治疗方案中肿瘤生长抑制率与单独每个基因的肿瘤生长抑制率,评价联合治疗的效果。结果:(1) pcDNA3.1-IFN-β质粒分别通过肿瘤接种原位肌肉注射和尾静脉注射,浓度设置为50μg/100μl,100μg/100μl,200μg/100μl,结果显示尾静脉注射100μg/100μl为合适的治疗方案,既对肿瘤的生长有明显的抑制作用(40%左右),同时毒副作用较小。(2) pcDNA3.1-TNF-α质粒通过肿瘤接种原位肌肉注射,浓度设置为10μg/100μl,30μg/100μl,50μg/100μl,100μg/100μl,结果显示最适治疗方案为肿瘤接种原位肌肉注射10μg,抑制肿瘤生长率为70%。(3) pcDNA3.1-CXCL-1质粒肌肉注射于肿瘤接种原位,浓度设置为5μg/100μl,10μg/100μl,30μg/100μl,50μg/100μl,100μg/100μl实验结果显示10μg/100μl即可抑制肿瘤生长40%左右。(4)将pcDNA3.1-IFN-β、pcDNA3.1-TNF-α、pcDNA3.1-CXCL-1三种质粒联合对荷瘤鼠进行治疗,可以得到比单独使用任何一种基因治疗都强的抑制效果,肿瘤生长抑制率能够达到80%。(5)在以上三种质粒联合治疗的基础上,我们另加入50μg的pcDNA3.1-CH510质粒注射到肿瘤接种部位,联合运用于H22肿瘤模型中进行治疗,可观察到肿瘤生长抑制在90%以上,甚至治疗组内部分小鼠肿瘤接种部位根本触摸不到肿瘤的生长。结论:将多种具有抗癌效果的细胞因子的基因以小剂量,多种方式组合在一起对肿瘤进行综合治疗,比单一基因治疗的效果好。
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