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目的:通过葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)实验观察甲状旁腺激素(PTH1-34)对原代C57小鼠胰岛分泌功能的影响。并通过检测胰岛细胞内cAMP含量以及钙成像技术检测胰岛细胞内钙离子含量探究其可能的作用机制。方法:胶原酶V消化原代C57小鼠胰腺,手工挑取胰岛,本实验可分为甲状旁腺激素组(PTH组)和溶剂对照组(Con组),观察甲状旁腺激素(PTH1-34)作用于C57小鼠胰岛后在低糖(2.8m M)和高糖(16.7mM)下胰岛素分泌量的变化。为探究其可能作用机制,行钙成像技术探究与钙的关系,并通过检测胰岛细胞内cAMP含量研究胰岛素分泌与cAMP之间的关系。结果:(1)本实验获得的胰岛为圆形、椭圆形的实心颗粒,边界清楚,没有毛刺。每只原代c57小鼠约可获得90-140个胰岛。(2)通过PTH1-34诱导的体外胰岛素分泌实验,测得孵育液中Ca浓度为1mM时胰岛素总量后可得到:2.8mM葡萄糖情况下Con组与PTH组(PTH1-34浓度分别为0.1ug/ml、1 ug/ml、10ug/ml)胰岛素分泌量分别是:(5.28±0.57)uIU/ml、(1.81±0.16)uIU/ml、(2.28±0.27)uIU/ml、(2.83±0.54)uIU/ml;可见低糖时PTH组胰岛素总量明显低于Con组,P<0.05,差异具有统计学意义;16.7m M葡萄糖情况下Con组与PTH组(PTH浓度分别为0.1ug/ml、1 ug/ml、10ug/ml)胰岛素分泌量分别是(49.66±5.97)uIU/ml、(37.45±1.84)uIU/ml、(30.96±2.88)uIU/ml、(30.70±2.33)uIU/ml,PTH组胰岛素总量显著低于Con组,P<0.05,差异具有统计学意义;16.7m M葡萄糖的Con组胰岛素总量显著高于2.8mM葡萄糖的Con组,P<0.001。也间接证明了本实验所获胰岛功能良好。而孵育液中Ca浓度为2.5mM时测得胰岛素含量为:2.8mM葡萄糖情况下Con组与PTH组(PTH1-34浓度分别为0.1ug/ml、1 ug/ml、10ug/ml)胰岛素分泌量分别是:(2.72±0.75)uIU/ml、(2.31±0.56)uIU/ml、(2.91±0.74)uIU/ml、(3.74±0.43)uIU/ml;16.7mM葡萄糖情况下Con组与PTH组(PTH浓度分别为0.1ug/ml、1 ug/ml、10ug/ml)胰岛素分泌量分别是(30.98±3.63)uIU/ml、(35.69±4.29)uIU/ml、(31.38±6.18)uIU/ml、(32.90±2.07)uIU/ml,可见增加钙离子浓度到正常时,PTH对胰岛素分泌无明显影响。16.7mM葡萄糖的Con组胰岛素总量显著高于2.8mM葡萄糖的Con组,P<0.001。(3)通过钙成像技术发现:16.7m M组和16.7mM+PTH组的Ration of Fura2(340/380)分别为(0.52±0.01)、(0.80±0.03),16.7mM+PTH组Ration of Fura2(340/380)显著高于16.7mM组,P<0.05,差异具有统计学意义。(4)16.7mM组、16.7mM+PTH组以及16.7m M+Forskolin组胰岛经粉碎后细胞内cAMP含量分别为(0.19±0.02)nmol/L、(0.22±0.03)nmol/L、(0.45±0.11)nmol/L,16.7mM+PTH组与16.7mM组相比,无明显统计学差异;16.7mM+Forskolin组cAMP含量显著高于16.7mM组,P<0.05,差异具有统计学意义,间接证明了本实验胰岛功能良好。结论:(1)采用胶原酶V消化胰腺以及手工挑取获得的胰岛纯度高,活性以及功能良好。(2)与低糖相比,高糖条件下胰岛素分泌显著增多。(3)低糖和高糖条件下,PTH对胰岛素分泌具有抑制作用。(4)甲状旁腺激素(PTH1-34)对胰岛素分泌的抑制作用与胰岛细胞内cAMP的含量无关。(5)鉴于本实验结果,推测PTH可促使细胞外钙内流入胰岛细胞,大量PTH可造成胰岛细胞内钙离子超载而形成钙毒性,进一步抑制胰岛素的分泌。