线粒体复合物Ⅱ及复合物Ⅲ抑制剂的抑制动力学研究

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线粒体是真核细胞进行呼吸作用的场所,位于内膜上,由4个相对分子量很大的跨膜蛋白(复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、和Ⅳ)、介于Ⅰ/Ⅱ与Ⅲ之间的泛醌以及介于Ⅲ与Ⅳ之间的cytc共同组成。线粒体呼吸链的功能是进行生物氧化并与ATP合成酶相偶联共同完成氧化磷酸化产生ATP。复合物Ⅱ催化电子由succinate传递至Q,而复合物Ⅲ主要催化电子由QH2传递到cytc并促使质子跨膜,是呼吸作用能量转换的中心成分。复合物Ⅱ和复合物Ⅲ是农用杀菌剂的理想靶标,具有重要的应用价值和农学意义。本文主要研究复合物Ⅱ、复合物Ⅲ以及SCR(它们的复合酶)与底物、制剂的相互作用,为抑制剂的设计提供理论依据以开发出新型的杀菌剂。为此我们进行了以下的工作:提取并纯化了琥珀酸-细胞色素c氧化还原酶,对所得到的酶进行了纯度测定和光谱定性。对复合物Ⅱ抑制剂进行了筛选及抑制动力学研究:我们首先对复合物Ⅱ的七种商品化杀菌剂进行测定,确定了它们的活性优劣顺序,它们与succinate及DCIP属非竞争性结合,而与底物Q属竞争性或混合性结合。我们设计合成了23个新的复合物Ⅱ抑制剂,但与商品化抑制剂相比活性较差,有待于进一步改造。对复合物Ⅲ抑制剂进行了筛选及抑制动力学研究:1、对以噁唑菌酮母体设计合成的28个新型噁唑烷二酮类衍生物进行活性测试,其中化合物Y12313(12.27nM)和Y12043(6.71nM)的活性略差于噁唑菌酮。2、对以吲唑磺菌胺为母体设计合成的18个新型化合物进行活性测试,发现这些化合物1001μM处的抑制活性都很低,连商品化的吲唑磺菌胺100μM处抑制率也只有45%。3、以辛唑嘧菌胺为母体设计合成的29个新化合物(4种结构类型)进行活性测试,前三种类型的部分化合物有活性,但活性远远差于辛唑嘧菌胺,结构四的4个化合物的活性与辛唑嘧菌胺相当甚至略好,有进一步研究的价值。综上所述本文提取并纯化了琥珀酸-细胞色素c氧化还原酶、并对所得到的酶进行了活性及纯度测定,并分别针对复合体Ⅱ抑制剂和复合体Ⅲ抑制剂进行了筛选及抑制动力学研究,为设计、开发出高活性的新型抑制剂提供思路。
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