全谷豆复合包对脂代谢紊乱大鼠胆固醇代谢的是主SREBP-2基因多态性与血脂异常的相关性研究

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目的:  (1)观察全谷豆复合包对脂代谢紊乱大鼠血脂水平,血清中内脂素含量,肝脏组织中固醇元件结合蛋白-2(SREBP-2)、低密度脂蛋白受体(LDLR)和脂肪组织中内脂素mRNA表达变化的影响,从而阐明全谷豆复合包改善高脂膳食诱导脂代谢紊乱大鼠胆固醇代谢的作用机制。  (2)了解南京市血脂异常中老年人群SREBP-2基因1784G>C位点多态性,分析该基因多态性与血脂异常的关系,从分子水平阐述中老年人群血脂异常的遗传学因素及发病机制,并为动脉粥样硬化的早期预防提出初步的理论依据。  方法:  (1)44只雄性SD大鼠在实验前适应性喂养一周后,按血脂水平随机分为高脂组、米面组、全谷豆复合包组和阴性对照组;参照美国营养学会推荐的AIN-93M动物合成饲料配方,适当调整蛋白质和蔗糖的比例,增加饱和脂肪酸含量,制成高脂组饲料,同时用粳米粉、面粉或全谷豆复合包粉分别代替高脂饲料中蔗糖和淀粉部分,制成米面组饲料和全谷豆复合包组饲料。阴性对照组给予基础饲料,另外三组大鼠分别喂饲高脂组饲料、米面组饲料和全谷豆复合包组饲料。  (2)实验开始前,大鼠尾静脉取血,测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和空腹血糖(FBG)。连续喂养8周,每2周一次尾静脉取血,测定TC、TG、HDL-C、LDL-C和FBG。实验结束后,收集大鼠股动脉血,脱颈椎处死,分离脏器,称重,计算脏体比和脂体比,并留存肝脏组织和脂肪组织于-80℃冰箱备用。  (3)运用酶联免疫吸附法测定大鼠血清内脂素浓度;运用半定量RT-PCR法测定大鼠肝脏组织中SREBP-2 mRNA和LDLR mRNA的表达以及脂肪组织中内脂素mRNA的表达。  (4)在南京市3个主城区13个社区中心进行基线体检调查后,采用分层多阶段整群随机抽样的方法筛选出血脂异常和血脂正常对照人群,运用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对所有研究对象进行SREBP-2基因型检测,并分析该基因多态性与中老年人群血脂异常的相关性。  结果:  (1)与高脂组和米面组比较,全谷豆复合包组大鼠体重、血清TC、TG、LDL-C和FBG水平显著下降(P<0.05),血清HDL-C水平显著升高(P<0.05)。  (2)全谷豆复合包组大鼠血清内脂素水平显著低于高脂组利米面组(P<0.05);与高脂组和米面组比较,全谷豆复合包组大鼠肝脏组织中SREBP-2 mRNA和LDLR mRNA的表达显著升高(P<0.05),脂肪组织中内脂素mRNA的表达明显降低(P<0.05)。  (3)血脂异常组人群的三种基因型GG、GC和CC构成比分别为74.8%、21.8%和3.4%;G等位基因的频率为85.7%,为优势等位基因,C等位基因的频率为14.3%;正常对照组人群的三种基因型GG、GC和CC构成比分别为68.5%、26.3%和5.2%,G、C等位基因的频率分别为81.7%和18.3%。两组人群的三种基因型频率均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,差异无统计学意义(P>0.05)。高TC血症、高TG血症、低HDL-C血症和混合型高脂血症四个组人群的各基因型和等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。  (4)血脂异常组携带1784C等位基因者与无1784C等位基因者相比,血清TC水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而TG和HDL-C水平差异无统计学意义P>0.05);正常对照组各基因型间血脂水平差异均无统计学意义(P>0.05)。高TC血症组携带1784C等位基因者与无1784C等位基因者相比,血清TC水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而TG和HDL-C水平差异无统计学意义(P>0.05)。高TG血症组、低HDL-C血症组和混合型高脂血症组各基因型间血脂水平差异均无统计学意义(P>0.05)。  结论:  (1)全谷豆复合包可以改善高脂膳食诱导脂代谢紊乱大鼠血糖、血脂和内脂素水平。  (2)全谷豆复合包可以调节高脂膳食诱导脂代谢紊乱大鼠的胆固醇代谢,其可能的机制是全谷豆复合包能激活SREBP-2、LDLR和内脂素的表达活性,从而明显提高了以SREBP-2为核心的固醇元件结合蛋白通路调控胆固醇代谢的水平,最终达到降低大鼠胆固醇水平,改善脂代谢紊乱的效果。  (3)SREBP-2基因1784G>C位点多态性可能主要影响高TC血症患者血清TC水平,与血清TG、HDL-C无关;C等位基因可能是高胆固醇血症和动脉粥样硬化的危险因素。本实验样本量为489例,但仍需扩大样本量,做进一步的研究证实。
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