【摘 要】
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目的:观察高糖环境下肾小管上皮细胞分化抑制因子2(Id2)和转录因子E2A的表达变化以及给予外源性骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对高糖培养的肾小管上皮细胞中Id2和E2A表达的影响,初步
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目的:观察高糖环境下肾小管上皮细胞分化抑制因子2(Id2)和转录因子E2A的表达变化以及给予外源性骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对高糖培养的肾小管上皮细胞中Id2和E2A表达的影响,初步探讨BMP-7改善高糖诱导的肾纤维化病变的可能机制。 方法:将体外培养的肾小管上皮细胞NRK-52E分为3组:Control组(高糖0h组)、高糖组(HG组)和HG+不同浓度BMP-7干预组(10ng/ml和20ng/ml),HG组和干预组分别设12h、24h和48h三个时间点。Western blot方法检测Id2、E2A、E-钙黏素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)蛋白的表达,Real time PCR方法检测Id2 mRNA的表达。利用质粒转染技术使肾小管上皮细胞HK-2中E2A(E12/E47)过表达,Real time PCR方法检测转染效率。通过划痕实验观察过表达E12、E47后以及阴性对照组(转染空载质粒)细胞迁移力情况。 结果:与Control组相比,HG组Id2的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白水平明显下调,E2A、α-SMA和Col-Ⅰ的蛋白水平明显上调(P<0.05);与HG组相比,20ng/ml BMP-7干预组Id2的mRNA和蛋白及E-cadherin的蛋白水平均较同时间点显著上调,E2A、α-SMA和Col-Ⅰ的蛋白表达显著下调(P<0.05)。相关性分析显示,高糖条件下Id2蛋白与E2A蛋白、E2A蛋白与E-cadherin蛋白呈显著负相关;E2A蛋白与α-SMA蛋白呈显著正相关(P<0.05)。过表达E12、E47后,细胞迁移力较阴性对照组明显增高。 结论:高糖刺激下肾小管上皮细胞Id2蛋白表达下调,E2A蛋白表达上调并促进EMT;给予外源性BMP-7可改善高糖诱导的EMT及纤维化效应,其机制可能与促进Id2蛋白的表达,抑制E2A蛋白的表达有关。
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