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受体酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine kinase inhibitors，TKIs）在晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗中占据了十分重要的地位。然而尽管TKI类药物可以有效清除具有相应靶点的肺癌，由于原发耐药及继发耐药的存在，导致其不能将肿瘤彻底清除。因此寻找能够安全有效地增强克唑替尼（crizotinib）抗肺癌活性的方法具有重大意义。Crizotinib是靶向肝细胞生长因子受体(c-MET)、间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase，ALK)融合基因以及ROS-1的多靶点TKI类药物，临床上用于治疗EML4-ALK融合基因阳性及c-MET基因扩增的晚期NSCLC患者。我们发现环孢霉素A(CsA)可以在体内外实验中显著增强crizotinib对多种表达c-MET的NSCLC细胞的增殖抑制作用。通过深入研究我们发现，crizotinib可以有效阻断MET下游的STAT3和AKT通路，但却通过引起肺癌细胞胞质内Ca2+(iCa2+)的升高激活下游Ca2+/calcineurin/Erk通路，从而对抗crizotinib诱导的凋亡与G2/M期阻滞。CsA增敏crizotinb的机制在于有效阻断calcineurin/Erk信号通路。进一步我们在体内外实验中证实Erk1/2的抑制剂PD98059也可以通过增加凋亡及G2/M期阻滞起到增敏crizotinib的作用，其效果及机制与CsA类似。本研究证实通过联用CsA或Erk1/2抑制剂可能可以增加crizotinib对c-MET扩增的非小细胞肺癌患者的临床疗效。 目的: 通过体内外实验，验证CsA对crizotinib抗肺癌活性的增敏作用，并通过深入研究其机制找到crizotinib原发耐药的一些潜在机制，为临床合理用药以及改善疗效提供一定的指导。 方法: 利用MTS以及克隆平板实验验证CsA对crizotinib的增敏作用;运用流式细胞仪定量分析CsA和crizotinib单药以及两物联用对肺癌细胞凋亡及周期的影响;通过western blot法分析CsA和crizotinib单药以及两物联用对凋亡相关蛋白，周期相关蛋白以及MET信号通路相关蛋白的影响;通过转染siRNA或质粒的方法研究下调或过表达Erk1/2对非小细胞肺癌对crizotinib敏感性的影响;建立SPC-A1裸鼠皮下移植瘤模型评估CsA以及PD98059对crizotinib在体内的增敏作用;利用PCR技术检测转染siRNA后肺癌细胞calcineurin的敲降效率;采用钙离子荧光探针染色法研究crizotinib对肺癌细胞胞质内钙离子浓度的影响。 结果: CsA可以显著提高crizotinib对多种NSCLC细胞系的增殖抑制作用。进一步研究显示CsA可以增强crizotinib诱导的凋亡以及G2/M期阻滞。 我们发现crizotinib可以明显抑制肺癌细胞的MET及其下游的STAT3与AKT通路，然而并不能有效抑制Erk1/2通路，相反，在一定的时间段里，crizotinib反而明显激活Erk1/2通路。CsA本身对MET，STAT3和AKT无影响，也不能改变crizotinib对这几条通路的影响。然而CsA不仅能够有效抑制肺癌细胞基础水平的Erk1/2，同时可以有效抑制crizotinib诱导的Erk1/2的活化。为了验证Erk1/2通路的激活是否为肺癌细胞逃避crizotinib毒性的机制，以及CsA是否通过抑制Erk1/2的活化来发挥其增敏作用，我们将Erk1/2的抑制剂PD98059与crizotinib联用，结果发现PD98059具有与CsA同样的增敏效果。我们进一步利用siRNA将肺癌细胞的Erk1/2敲降后，其对crizotinib敏感性增加，而利用质粒将Erk1/2过表达后，其对crizotinib敏感性减弱。至此，我们可以确信Erk1/2的激活是肺癌细胞逃避crizotinib毒性的重要机制，CsA通过抑制Erk1/2的活化发挥其增敏作用。 机制研究发现crizotinib可以诱导肺癌细胞iCa2+的显著升高，从而激活Calcineurin/Erk通路，而CsA可以通过抑制Calcineurin阻断Erk的活化。Calcineurin的另一个抑制剂FK506，以及calcineurin的siRNA均可抑制肺癌细胞的Erk1/2活化并增强crizotinib的抗肺癌活性。 最后，我们利用裸鼠皮下移植瘤模型进一步证实CsA以及PD98059在体内同样能够起到增强crizotinib抗肺癌活性的作用。 结论: Crizotinib可以诱导肺癌细胞iCa2+的显著升高，从而激活Calcineurin/Erk通路，而这一通路的激活是肺癌细胞对抗crizotinib毒性的重要机制。CsA可以通过阻断Calcineurin/Erk通路在体内外增加crizotinib的抗癌活性，Erk通路的抑制剂PD98059亦可在体内外对crizotinib起到增敏作用。联用CsA或者Erk抑制剂有希望成为改善crizotinib对肺癌疗效的一种新的策略。