研究目的： 了解活化抗原CD69，CD38，HLA-DR在尖锐湿疣(CA)皮损角质形成细胞(KCs)、树突状细胞(DCs)和真皮浸润单一核细胞(MNCs)上表达的变化，分析三种抗原分子在不同病程CA患者免疫细胞表达的意义，进一步揭示其在CA免疫发病中的作用机制，寻找对临床上判断CA病程的转归和为CA患者进行免疫学治疗的重要临床参考依据。 材料与方法: 一、研究对象： 1.CA患者组： 50例CA患者，均来自我院皮肤科门诊，初发组30例，复发组20例。 2.正常对照组： 15例，均为我院外科门诊手术室行包皮环切术的健康男性的正常包皮组织。 二、实验方法与步骤： 1.取材及固定： CA患者组：选取具有典型临床特征的皮损，局部常规消毒，局麻，手术剪将疣体从基底部剪除。对照组：行包皮环切术的包皮内板。标本置于10﹪福尔马林液中固定。 2.标本常规酒精脱水，石蜡包埋。 3.石蜡块切成厚约5μm切片，并裱于经处理的清洁玻片上。 4.免疫组织化学染色(S-P法)：CD69，CD38，HLA-DR的单克隆抗体稀释度均为1∶50。常规脱蜡水化，置柠檬酸盐缓冲液高温高压抗原修复，滴加过氧化物酶阻断剂、非免疫性动物血清等，室温各孵育10min，去掉多余溶液，滴加第一抗体，4℃冰箱过夜；滴加生物素标记的二抗，室温孵育10 min；滴加过氧化酶标记的链亲合素，室温孵育10 min；DAB显色，苏木素复染封片。以上各步骤间均用0.01M PBS(pH7.4)漂洗3次，每次3-5 min，以正常淋巴组织作阳性对照，空白对照以PBS代替一抗，余同前。 三、结果判断： 光学显微镜观察切片。 阳性判断标准：根据Shimizu法改良而成<;[44]>。免疫组化染色阳性细胞为细胞膜或细胞浆染成棕黄色。连续观察10个高倍视野，按染色阳性细胞数占整个细胞数的总和分为：阴性(-)：阳性细胞数<1﹪；弱阳性(+)：阳性细胞数在1﹪-10﹪；阳性(++)：阳性细胞数10﹪-50﹪；强阳性(+++)：>50﹪。 四、统计学处理： 表达程度比较采用等级资料的秩和检验，显著性检验水平α=0.05。 实验结果： 一、CA患者组皮损、正常对照组组织CD69，CD38，HLA-DR阳性表达的分布： 1．正常对照组表皮KCs、DCs，以及真皮不表达CD69，CD38，HLA-DR。 2．两组CA患者皮损均有CD69，CD38，HLA-DR表达： (1)CD69阳性细胞主要分布在基底层和棘细胞层的KCs、DCs，阳性反应位于细胞膜或细胞浆，真皮浸润MNCs无表达(见图3-1，3-2)。 (2)CD38阳性细胞主要分布在基底层和棘细胞层的KCs、DCs及真皮浸润的MNCs，阳性反应位于细胞膜或细胞浆(见图3-3，3-4)。 (3)HLA-DR.阳性细胞主要分布在基底层和棘细胞层的KCs、DCs及真皮浸润的MNCs，阳性反应位于细胞膜或细胞浆(见图3-5，3-6)。 二、两组CA患者皮损表皮CD69，CD38，HLA-DR的表达阳性率及阳性表达程度比较： 1.CA患者皮损初发组与复发组表皮KCs、DCs上CD69表达阳性率分别为93.3﹪和90﹪；表达强度为-、+、++、+++的例数分别为2和2、4和7、5和4、19和7，表达程度比较初发组高于复发组，差异有统计学意义，P<0.05(Z值=-1.9846)。 2.CA患者皮损初发组与复发组表皮KCs、DCs上CD38表达阳性率分别为93.3﹪和90﹪；表达强度为-、+、++、+++的例数分别为：2和2、4和6、7和7、17和5，表达程度比较初发组高于复发组，差异有统计学意义，P<0.05(Z值=-2.0949)。 3.CA患者皮损初发组与复发组表皮KCs、DCs上HLA-DR表达阳性率分别为100﹪和100﹪；表达强度为-、+、++、+++的例数分别为：0和0、8和9、6和9、16和2。表达程度比较初发组高于复发组，差异有统计学意义，P<0.05(Z值=-2.5331)。 三、两组CA患者皮损真皮CD69，CD38，HLA-DR的表达阳性率及阳性表达程度比较： 1.CA患者皮损初发组与复发组真皮浸润MNCs上CD38阳性表达率分别为66.7﹪和40﹪；表达强度为-、+、++、+++的例数分别为：10和12、11和6、5和1、4和1，表达程度比较初发组高于复发组，差异有统计学意义，P<0.05(Z值=-2.0133)。 2.CA患者皮损初发组与复发组真皮浸润MNCs上HLA-DR阳性表达率分别为76.7﹪和70﹪，表达强度为-、+、++、+++的例数分别为：7和6、5和9、6和3、12和2，表达程度比较初发组高于复发组，差异有统计学意义，P<0.05(Z值=-2.0501)。 3.CA患者皮损初发组与复发组真皮浸润MNCs上CD69阳性表达率均为0；表达强度均为"-"。 结论： 1.CA患者皮损组织表皮KCs、DCs均有CD69，CD38，HLA-DR表达，且表达阳性率达90﹪以上，而正常对照组无表达。表明机体受HPV抗原的刺激，局部细胞免疫状态发生了改变，表皮KCs、DCs得到明显活化，机体对HPV感染处于一种较高的应答状态，从而可以启动局部特异性细胞免疫反应，利于机体清除HPV。 2.两组CA患者皮损组织表皮KCs、CDs上CD69，CD38，HLA-DR阳性表达强度比较发现，初发组高于复发组，差异有统计学意义，表明患者由于受到HPV的破坏，细胞免疫功能由早期的活跃状态发展到晚期的抑制状态，细胞活化能力下降，机体对HPV感染处于低水平的应答状态，从而使HPV清除不足，导致病情反复。 3.本实验首先开展对CA患者皮损真皮浸润MNCs上CD69，CD38，HLA-DR表达的研究，发现两组CA患者真皮浸润MNCs均无CD69表达，而CD38，HLA-DR阳性表达强度比较发现，初发组高于复发组，差异有统计学意义，说明CA初发患者真皮浸润细胞的激活水平同样高于复发患者。 4.测定CA患者皮损组织免疫细胞活化抗原CD69，CD38，HLA-DR的阳性表达率和表达强度，更好、更全面地反映了CA不同时期局部免疫细胞的活化状态，进一步揭示了它们在CA免疫发病中的作用机制，对临床上判断CA病程的转归和为CA患者进行免疫学的治疗提供了科学可靠而又重要的临床参考依据。