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目的分离、鉴定黄精化学成分,并进一步探讨以活性为先导的化合物分离方法;结合药理试验确定黄精中具有活性的物质,为黄精的资源开发提供依据。方法1、对黄精含化学成分进行系统分离,确定黄精所含的化合物组成。2、本文将细胞膜亲和色谱技术和磁性微球技术结合,建立细胞膜磁性微球“垂钓”方法,用于分析中药药效物质,并以该方法为先导分离确定黄精中潜在的活性化学成分。3、采用活性试验对所分离获得的化合物进行研究,确定具有活性的化合物。结果:1、本文采用传统的分离方法对黄精化学成分进行了分离鉴定。共得到10个甾体皂苷类成分,6个高异黄酮类成分,1个生物碱类成分,分别如下:(25R)-螺甾-5-烯-3β,17α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃岩藻糖苷(1),(25S)-螺甾-5-烯-3β,17α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃岩藻糖苷(2),(25R)-螺甾-5-烯-3β,17α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃岩藻糖苷(3),(25S)-螺甾-5-烯-3β-醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃岩藻糖苷(4),(25R/S)-螺甾-5-烯-3β,12β-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃岩藻糖苷(5),(25R)-螺甾-5-烯-3β,17α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(6),(25S)-螺甾-5-烯-3β-醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(7),(25R)-螺甾-5-烯-3β,17α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(8),(25R/S)-螺甾-5-烯-3β,12β-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(9),(25R/S)-螺甾-5-烯-3β-醇-12-酮-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(10),4￠,5,7-三羟基-6,8-二甲基高异黄酮(11),4￠,5,7-三羟基高异黄酮(12),4￠,5,7-三羟基6-甲基高异黄酮(13),2￠,5,7-三羟基-4￠-甲氧基-6,8-二甲基高异黄酮(14),2￠,5,7-三羟基-4￠-甲氧基高异黄酮(15),2￠,5,7-三羟基-4￠-甲氧基-8-甲基高异黄酮(16),黄精碱A(17);其中化合物1-5为文献尚未报道的化合物。2、本文将巨噬细胞膜亲和技术以及磁性微球技术引入到中药药效物质研究中,建立了巨噬细胞膜磁性微球“垂钓”色谱/质谱分析潜在活性物质结构的方法。以该方法为先导对黄精具有活性成分的筛选研究结果表明黄精中含有的(25R)-螺甾-5-烯-3β,17α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃岩藻糖苷、(25R)-螺甾-5-烯-3β,17α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷等甾体皂苷类的化合物为潜在的活性成分。3、以细胞上清液TNF-α量的变化和NO生成量为指标,采用RAW 264.7巨噬细胞进行的抗炎活性研究表明所分离获得的甾体皂苷类成分具有一定的抗炎活性。这与细胞膜磁性微球“垂钓”的结论一致,佐证了该方法的作用。4、以葡萄糖消耗量为指标,采用3T3-L1脂肪细胞对从黄精中分离的黄酮类化合物进行降糖活性研究结果表明化合物11、12、13和16在浓度为10μmol/L时可降低3T3-L1脂肪细胞培养基中葡萄糖的含量,说明此类化合物在该浓度下具有改善3T3-L1脂肪细胞的胰岛素抵抗状态,增强3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖消耗能力。5、以α-葡萄糖苷酶抑制率为指标对α-葡萄糖苷酶活性抑制研究中,化合物13、14、15和16在浓度为50μg/m L时对α-葡萄糖苷酶抑制率分别为61%、58.1%、64.9%、65.1%。这表明在该浓度下化合物13、14、15和16可能通过抑制α-葡萄糖苷酶活性来发挥降糖作用。结论本文对黄精的活性成分进行了分离、鉴定,并建立了巨噬细胞细胞膜-磁性微球“垂钓”色谱/质谱分析中药活性成分的方法;所建方法可用于中药黄精活性物质的筛选。本研究不仅可为中药药效物质研究提供新思路,而且为中药黄精的资源开发提供依据。