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第一部分大鼠骨髓间充质干细胞旁分泌物质对CBRH-7919肝癌细胞系增殖和侵袭能力的影响目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞旁分泌物质对大鼠CBRH-7919肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响,。方法分离Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),鉴定后进行体外培养,流式细胞仪鉴定细胞表型,制备含有骨髓间充质干细胞旁分泌物质的条件培养基(BMSC-CM), MTT比色法检测BMSC-CM对CBRH-7919肝癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检测BMSC-CM对CBRH-7919肝癌细胞周期的影响,ELISA检测BMSC-CM对CBRH-7919肝癌细胞分泌AFP的影响,Transwell小室检测]BMSC-CM对CBRH-7919肝癌细胞侵袭能力的影响。结果1.密度梯度离心法和贴壁细胞筛选法分离出的大鼠BMSCs,培养的第三代细胞呈明显成纤维细胞状,排列有一定的方向性,折光性强,贴壁生长,细胞表型为CD29+CD44+CD34-CD45-2.MTT比色法结果显示：25%、50%、75%及100%BMSC-CM组的CBRH-7919肝癌细胞吸光度值(A值)分别为0.395±0.050、0.459±0.079、0.501±0.084及0.566±0.099,各组显著高于0%BMSC-CM组(0.277±0.064)(P<0.05),随着BMSC-CM浓度的增加,A值依次升高,呈浓度依赖性。3.流式细胞仪结果显示：25%、50%、75%及100%BMSC-CM组的CBRH-7919肝癌细胞分裂增殖指数分别为20.773±1.342、21.838±1.368、23.503±1.568和26.486±2.124,各组显著高于0%BMSC-CM组(16.653±0.847)(P<0.05),随着BMSC-CM浓度的增加,细胞分裂增殖指数依次升高。4. ELISA结果显示：25%、50%、75%及100%BMSC-CM组的CBRH-7919肝癌细胞分泌的AFP值分别为12.562±0.071、14.660±0.106、16.397±0.058及23.196±0.137,均高于0%BMSC-CM组(3.143±0.033)(P<0.05),可以看出随着BMSC-CM浓度的增加,AFP的量依次升高。5. Transwell小室侵袭实验结果显示：25%、50%、75%和100%BMSC-CM处理后,Transwell小室膜上CBRH-7919肝癌细胞数分别为22.000±1.309、56.750±1.669、70.000±1.309、99.620±1.847,均多于0%BMSC-CM组(9.375±1.061)(P<0.05),随着BMSC-CM浓度的增加,侵袭能力逐渐增加,呈浓度依赖性。结论1.采用密度梯度离心法和贴壁细胞筛选法可以成功分离出大鼠骨髓间充质干细胞,经流式细胞仪鉴定细胞表型为CD29+CD44+CD34-CD45-;2.大鼠骨髓间充质干细胞旁分泌物质对CBRH-7919肝癌细胞系的增殖和侵袭有一定的促进作用。第二部分CBRH-7919肝癌细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞向血管内皮样细胞分化的初步研究目的探讨CBRH-7919肝癌细胞是否可以诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为血管内皮样细胞及其机制。方法应用1μm小孔的Transwell小室构建BMSCs与CBRH-7919肝癌细胞的共培养模型,分3组：单独BMSC组即上层不接种细胞,仅在下层接种BMSCs,共培养组即上层为CBRH-7919肝癌细胞,下层接种BMSCs,含有抗VEGF抗体-Avastin的共培养组即在共培养组内加入抗VEGF抗体-Avastin,48h和72h后,免疫荧光法检测骨髓间充质干细胞VEGFR2和CD31的表达,半固体培养基检测BMSCs毛细血管样结构的形成。结果1.单独BMSC组48h和72h时CD31和VEGFR-2的表达均阴性,共培养组48h时BMSC少量表达CD31和VEGFR2,阳性率分别为：(11.50±1.87)%和(12.33±1.37)%,72h时,CD31和VEGFR2表达明显增多,阳性率分别为：(24.43±2.23)%和(24.86±0.69)%,而含Avastin的共培养组CD31和VEGFR-2表达一直均阴性。2.单独BMSC组48h和72h时均未见毛细血管样结构形成,共培养组48h时出现明显的毛细血管样结构(8.00±0.05)个/高倍视野,72h时毛细血管样结构明显增加(22.00±0.02)个/高倍视野,而含Avastin的共培养组一直未见毛细血管样结构形成。结论CBRH-7919肝癌细胞与大鼠骨髓间充质干细胞共培养后,骨髓间充质干细胞分化成血管内皮样细胞,这一过程可能是通过CBRH-7919肝癌细胞分泌的VEGF来诱导分化的。