酶解—膜分离耦合制备米糠ACEI肽的研究

来源 :江苏大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:jacklee12345678
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目前在用米糠制取ACEI肽的研究中,普遍存在着蛋白转化率低、酶利用不充分等问题。为提高生产效率,解决以上问题,试验以脱脂米糠为原料进行了利用酶解-膜分离耦合技术制备ACEI活性肽的研究。测定了试验原料脱脂米糠的主要成分,其蛋白质、脂肪、水分和灰分的含量分别为15.8%、2.3%、4.8%和9.5%。以碱提酸沉淀法提取本试验反应底物——米糠粗蛋白,测定收率和纯度分别为25.50%和68.85%。以米糠粗蛋白为反应底物,用7种商业蛋白酶进行水解反应,以酶解液对ACE的抑制率为指标,初步选定其中3种效果较优的蛋白酶为进一步研究对象;然后对初步选定的3种蛋白酶进行单因素、正交试验,将3种酶在各自最佳作用条件下测定酶解液抑制率,横向比较后确定蛋白酶D为反应用酶。用截留分子量为10、8、5、3kDa的超滤膜对酶解液进行了分离纯化,以滤液的IC50值为考察指标,确定截留分子量为8kDa的超滤膜为本试验酶膜耦合反应选用膜器。在不补料的情况下利用酶解-膜分离耦合系统测定了米糠蛋白的相对最大转化率为68.73%。在间歇式酶膜反应中,考察了酶膜耦合时间、底物浓度、加酶量、温度、pH值、出肽速率等因素对底物蛋白转化率的影响,并进行正交优化试验。得到最佳工作参数为温度45℃、pH9.0、加酶量([E]/[S])10%、出肽速率11mL/min,对应的底物蛋白转化率达到47.50%,该值是相同条件下传统制取方法的1.27倍。以系统跨膜压力和不同时段滤液抑制率为指标,对连续式酶解-膜分离耦合系统进行了稳定性试验。结果表明,反应系统可以稳定运行210min,生产效率较传统的活性肽制取方法提高了6.37倍。
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