论文部分内容阅读
近些年,由于环境雌激素(Environmental Estrogens，EEs)对内分泌系统具有强的干扰作用,会导致畸形、发育异常、生殖功能障碍、代谢紊乱和癌症等多种疾病,且环境雌激素分布广、作用机制复杂,不仅会影响人类健康而且还会威胁生物物种的存亡。所以,必须建立分析检测环境雌激素快速、有效的方法。量子点(Quantum dots,QDs)作为一种特殊的纳米材料,不但具有发光强度高、光化学稳定性好、能耐受更长的光激发和光发射周期、良好的光化学稳定性、激发和发射周期可持续几小时的良好性能,而且还有激发光谱宽,发射光谱窄且对称、可控,可用一种波长的光激发大小不同的同种量子点获得丰富的标记颜色等优点。用量子点做标记物对生物大分子标本的活性无伤害,在活体分析和细胞在线监测中显示出特殊的优势。 本论文建立了量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析测定己烯雌酚、雌二醇、双酚A和雌三醇的新方法。全文基本内容如下: 一、量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析法测定己烯雌酚 以己烯雌酚半抗原小分子与牛血清白蛋白大分子偶联后制得的己烯雌酚完全抗原免疫健康兔子得到的抗-己烯雌酚抗体包被微孔板的模式,利用量子点标记的链霉亲和素为荧光探针,结合生物素-亲和素系统,建立了量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析测定己烯雌酚的新方法。方法在0.01ng/mL～10mg/mL之间有良好的线性关系,其线性回归方程为△I(I0-I)=1299.7lgC+5341.7,相关系数为R2=0.9776,检出限为5.6pg/mL。并用该方法对鸡肉中己烯雌酚进行了测定,加标回收率在95.0％～111.9%之间,方法灵敏度较高,准确度和精确度良好。 二、量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析法测定雌三醇 用量子点标记链霉亲和素为荧光探针,结合生物素-亲和素放大系统,采用自制抗-雌三醇抗体包被微孔板的竞争免疫分析模式,建立了量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析测定雌三醇的新方法。该方法线性范围为1.0pg/mL～10mg/mL,线性回归方程为△I(I0-I)=1191.9lgC+5936;检出限6.2pg/mL,应用于尿样中雌三醇的测定,样品加标回收率在98.6%～102.7%之间,结果良好。 三、量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析法测定双酚A 建立了一种灵敏度高、选择性好的量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析检测双酚A的新方法。实验优化了温育时间、温度、缓冲溶液pH值、试剂浓度等测量条件,双酚A浓度在0.1ng/mL～1.0mg/mL之间呈良好的线性关系,线性回归方程是△I(I0-I)=4852.6lgC+9100.2;相关系数为R2=0.9888;检出限为7.7pg/mL。并且计算得到相对标准偏差在1.0%～2.4%之间。样品加标回收率在103.0%～109.3%之间,结果较好。 四、量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析法测定雌二醇 采用包被雌二醇完全抗原的竞争免疫分析模式,以量子点标记链霉亲和素为荧光探针,建立了一种量子点标记链酶亲和素的荧光免疫分析测定雌二醇的新方法。对温育温度和时间、缓冲溶液pH值、试剂浓度等几种测量参数进行了优化,方法在0.01ng/mL～10mg/mL浓度范围有较好的线性关系,线性回归方程为△I(I0-I)=2779.5lgC+6897.9,相对标准偏差为1.5%～5.9%,检出限为5.4pg/mL。方法应用于样品中雌二醇检测,回收率在95.5%～120.0%之间,结果满意。