星星草PutACBP1基因的克隆及其功能分析

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酰基辅酶A结合蛋白(Acyl-CoA-bindingproteins,ACBPs)是一类脂类载体蛋白,具有结合和运输脂类物质的功能,在植物生长发育和逆境(低温、氧化、干旱和重金属)应答调控过程中发挥了重要作用。但其在植物盐碱胁迫应答中的作用未见报道。星星草(Puccinellia tenuiflora 是一种单子叶禾本科盐生植物,是研究植物盐碱应答机制的理想模式植物。本研究,利用分子遗传学技术从星星草中克隆到PutACBP1基因,其开放阅读框为981 bp,编码326个氨基酸。PutACBPl是ACBP家族Class II亚族的成员之一,含有一个ACB结构域和Ankyrin结构域。荧光定量PCR分析表明,PutACBP1基因在星星草根、茎、叶、叶鞘、花、穗和种子均有表达,在叶中的表达量最高,在茎中表达量最低。在逆境(200 mmol/L NaCl、100 mmol/L NaHCO3、75 mmol/L Na2C03 胁迫、160 μmol/L CdCl2、10 mmol/L H2O2 和 4℃)胁迫时,根和叶中的PutACBP1都受诱导表达。这暗示着PutACBP1可能参与了盐碱、氧化、重金属和低温胁迫的应答过程。烟草(Nicotiana tabacum L.)叶片细胞和拟南芥(Arabidopsis thaliana)叶片细胞中定位分析表明,正常条件下PutACBP1定位于在细胞质。通过PutACBP1基因原核表达体系,诱导并纯化到(His)6-PutACBP1融合蛋白,利用磷脂结合实验初步证实了 PutACBP1具有与磷脂酰胆碱(Phosphatidylcholine,PC)结合的能力。通过构建pBI121-PutACBP1重组质粒,并利用农杆菌侵染法分别获得PutACBP1过表达拟南芥植株。对转PutACBP1基因拟南芥植株的耐盐性分析表明,在100 mmol/L和125 mmol/L NaCl胁迫下,过表达PutACBP1基因拟南芥的根长和鲜重都优于野生型拟南芥。拟南芥同源基因AtACBP2突变体植株(SALK-023077)的耐盐性分析表明,在100 mmol/L和125 mmol/L NaCl胁迫下,突变体拟南芥植株的根长和鲜重都低于野生型拟南芥。综上所述,在逆境应答过程中,PutACBP1对于植物盐胁迫应答具有正调控作用。同时PutACBP1可能通过与磷脂酰胆碱结合调控其运输到质膜,参与植物的脂类代谢。这些结果为深入研究星星草PuACBP1基因盐碱应答分子调控机理提供了新的证据。
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