K在大鼠中的表达及麻黄对平滑肌细胞增殖的研究

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本论文优化、比较了分离肺动脉平滑肌细胞和支气管平滑肌细胞的两种方法:植块培养法和酶消化法。结果表明,分离肺动脉平滑肌细胞用酶消化法较好。分离、剪碎的肺动脉平滑肌用0.2﹪的Collagenase I 37℃恒温消化1hr左右后,再用0.05﹪的Trypsin室温消化5~10分钟,辅以吹打,终止消化得到大量带状或纺锤状、细胞膜光滑、胞质均匀的平滑肌细胞。分离的支气管平滑肌剪碎成1mm3的小块采用植块培养的方法较好,1周后有细胞从边缘爬出,大约3~4周后铺满培养皿,所得细胞呈梭形,纯度较高。用含10﹪FBS的DMEM培养基进行传代培养。 KATP通道Kir亚基有Kir6.1和Kir6.2两种类型,SUR亚基有SUR1、SUR2A和SUR2B三种类型。本论文应用RT-PCR技术,从原代培养的Wistar大鼠肺动脉平滑肌细胞及支气管平滑肌细胞第3-5代提取总RNA,逆转录,针对Kir6.1、Kir6.2、SUR1、SUR2A和SUR2B的特异性片段进行PCR扩增鉴定,发现肺动脉平滑肌细胞有Kir6.1,SUR1和SUR2B的表达,其中SUR1表达量较弱;支气管平滑肌细胞有Kir6.1和SUR2B的表达。我们进一步针对Kir6.1和SUR2B用肺动脉平滑肌细胞和支气管平滑肌细胞总RNA进行了RT-PCR扩增,都获得了预期大小的PCR产物。 麻黄是治疗呼吸系统疾病和心血管疾病的重要中药。研究表明,其主要成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱300μg/ml作用48hrs后对肺动脉平滑肌细胞增殖抑制率达到39.6﹪和42.7﹪;前者作用72hrs后对支气管平滑肌细胞增殖抑制率为7.2﹪,而后者则基本没有影响。
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