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AiL3菌株是本实验室从海陆两栖植物红树体内分离获得的一株对芒果炭疽菌等多种植物病原真菌有较强拮抗作用的海洋细菌,并已证明其产生的主要抗菌活性物质为蛋白。本文在此基础上对该菌株分泌的抗菌蛋白进行纯化,并对其防治采后芒果炭疽病的效果及其防病机理进行了研究。结果如下:1.用40%~50%饱和度硫酸铵分级沉淀、热处理、柱层析等方法分离纯化AiL3菌株发酵液中的抗菌物质,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,证明AiL3菌株分泌的胞外抗菌物质主要为分子量约28kD的抗菌蛋白,该蛋白含有18种氨基酸。理化性质测定结果表明:该抗菌蛋白耐高温,在121℃下处理20min活性基本保持不变;对酸碱较稳定,pH5~10范围内对芒果炭疽菌的抗菌活性基本不变;同时,对紫外线也有较强的耐受性。2. AiL3抗菌蛋白防治采后芒果炭疽病结果表明:20、40、60g/mL蛋白液对芒果炭疽病的防效分别为27.3、38.2、45.1%,其中60g/mL蛋白液与施保克(43.6%)防效相当。对芒果内生理生化机制测定结果发现,分别用抗菌蛋白、PB缓冲液、无菌水处理后再接种芒果炭疽菌孢子,芒果内可溶性蛋白和丙二醛(MDA)含量及防御性酶活性与对照相比,抗菌蛋白处理芒果内可溶性蛋白含量增加,而丙二醛(MDA)含量上升幅度下降;同时,超氧化物歧化酶(SOD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性增加,而过氧化物酶(POD)活性下降。由此可见,抗菌蛋白可诱导芒果内可溶性蛋白增加,减少果内丙二醛等有害物质的产生,同时能提高部分防御性酶活性,从而控制芒果病害扩展。3. AiL3抗菌蛋白抑制芒果炭疽病菌机理测定:抗菌蛋白对病原菌菌丝、孢子的形态影响扫描电镜观察发现,随着蛋白作用时间的延长,菌丝分枝增多和缢缩,菌丝塌陷逐渐严重,出现断裂,内含物外渗,最终菌丝成畸形多分枝小片段,而孢子则出现肿大,破裂,内容物渗出,最终留下空壳。AiL3抗菌蛋白对病菌细胞壁、细胞膜影响及DNA、蛋白、糖等物质代谢影响测定表明,抗菌蛋白可改变病原菌细胞膜透过性,引起细胞内容物外渗,但对细胞壁几丁质无作用;同时,抗菌蛋白能使菌体糖类、蛋白等物质含量增加,而对DNA含量无影响。