牡丹芍药组间远缘杂交及‘凤丹’胚培养研究

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本文以芍药品种‘粉玉奴’(Paeonia lactiflora‘Fenyunu’)为母本,牡丹品种‘凤丹’(Paeonia suffruticosa‘Fengdan’)为父本,进行远缘杂交。通过对其花粉的贮藏和活力测定以及电镜扫描,对比杂交亲本花粉贮藏过程中花粉活力变化、花粉形态差异;试验对母本‘粉玉奴’开花习性和柱头可授期进行了观察统计,确定了最佳授粉时期;通过对人工授粉后柱头和胚胎的跟踪观察,探究了远缘杂交不育的原因。对‘凤丹’成熟胚培养研究了根长和不同GA3和6-BA对胚离体组织培养的影响。研究结果如下:  1.所用父本‘凤丹’花粉活力在相同的贮藏条件下的不同时期内均高于芍药母本‘粉玉奴’,虽然随着贮藏时间的增加,花粉活力逐渐下降,但是授粉前花粉活力66.03%,符合杂交授粉用花粉标准。电镜扫描试验结果表明,亲本花粉粒形态相似,只在表面纹饰上有差异,且父本‘凤丹’花粉畸形率小于母本‘芍药’。  2.‘粉玉奴’群体花期为4月25日~5月3日,4月28日进入盛花期;松雷-大蕾-开放的过程约需要1~2d,盛花期约4~5d;盛花期的第二天柱头开始分泌粘液,通过对柱头的追踪观察,确定第2~6d为柱头的可授期,开花后第4~5d可授性最强,粘液能够粘住花粉。  3.牡丹与芍药远缘杂交主要存在受精前障碍,‘凤丹’花粉能够在芍药柱头上粘附并萌发,但是萌发时间滞后,花粉管的生长受到阻碍,表现出不同形式的畸形,并诱导柱头产生一系列的胼胝质反应,最终使花粉管难以穿过花柱进入子房完成受精。  4.对胚珠的切片观察未发现胚囊内有胚生成或胚败育,未完成双受精的个体在授粉14d后与正常自然结实的有明显差别,具体表现为,心皮表面皱缩,色泽暗淡,授粉后早期胚珠就停止增大、皱缩,之后逐渐干瘪。试验最终获得杂交种子49粒,远缘杂交结实率为1.41%。  5.胚的组织培养试验表明根长4-5cm时通过添加激素打破上胚轴休眠所需时间最短,但是最终的胚苗褐化和愈伤较为严重,平衡各项指标后认为打破上胚轴休眠适宜的根长为3-4cm的胚苗。不同根长胚苗可溶性糖含量差异不显著,随着根长度增加,可溶性淀粉含量总体呈下降趋势,可溶性蛋白含量呈“下降-上升-下降”的趋势。  6.无论是单一添加GA3还是同时添加GA3与6-BA都能打破上胚轴休眠长出真叶,两者适宜的配比能够加速上胚轴休眠解除的速度,并提高成苗率。打破上胚轴休眠所需时间最短的激素配比为6-BA0.1 mg·L-1+GA31.0mg·L-1,最优的配比为6-BA0.5mg·L-1GA31.0mg·L-1。另外,在两种激素浓度较高时,胚苗出现了褐化和愈伤化现象。
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