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目的:为探索吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase, IDO)及其代谢微环境(低色氨酸及色氨酸代谢产物堆积)在动脉硬化闭塞症(atherosclerotic occlusive, ASO)、经皮动脉腔内血管成形术(percutaneous transluminal angioplasty, PTA)及支架植入术后再狭窄(restenosis, RS)等病理过程中的作用,本实验研究其体外对血管平滑肌细胞(Vascular Smooth Muscular Cell, VSMC)增殖及表型转换的影响。方法:采用血管环翻转贴壁法原代培养小鼠主动脉平滑肌细胞(SMCs),并对其进行平滑肌α-肌动蛋白(SM α-actin)免疫细胞化学法(immunocyto-chemistry, ICC)鉴定;应用低色氨酸(Low-tryptophan, L-Trp)及其代谢产物犬尿氨酸(Kynurenine, KYN)培养并观察对其增殖能力及表型基因表达的影响;通过与高表达IDO的小鼠血管瘤内皮细胞(EOMA, ATCC(?) CRL-2586TM)联合培养,利用MTT法检测其增殖情况,并应用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantified real time PCR, qRT-PCR)检测其表型基因的表达水平上的差异。使用SPSS 19.0软件包进行数据分析。结果:经上述方法体外培养主动脉SMCs,5-10天可有细胞萌出,每取材2只小鼠可获得约6×105个二代SMCs,传至第三代时细胞生长呈典型的“峰”和“谷”形态,经SM α-actin免疫组化鉴定呈阳性(棕色),细胞纯度达95%以上。3-10代细胞增殖旺盛,形态典型,细胞传代至10-12代以后细胞形态变化较大,生长缓慢,凋亡增多。取3-5代SMCs用于后续实验。L-Trp可以较为明显抑制SMCs的增殖,但其代谢产物KYN则只有在高浓度下才会对SMCs的增殖产生抑制作用,而且这种抑制作用在培养96小时后才会表现出来,qRT-PCR显示:在120小时的培养时间内,无论是L-Trp还是KYN培养均未对SMCs收缩表型基因Smoothelin-B的表达产生显著影响,单纯KYN (200 μM)培养对合成表型基因Syndecan-1的表达亦未产生明显影响,而只有L-Trp (10μM)及L-Trp+KYN联合培养组在培养72h、96h、120h时Syndecan-1的表达显著下调。考虑可能是单纯色氨酸饥饿环境产生的影响,而代谢产物KYN (200 μM)并不能显著影响此两种表型基因的表达。SMCs与高表达小鼠IDO的EOMA共培养后96h、120h后,SMCs的增殖受到抑制,而添加IDO特异性抑制剂1-mT(1-methyl tryptophan,1-甲基色氨酸)后这种抑制作用消失,提示IDO对SMCs的增殖产生抑制作用。qRT-PCR结果提示平滑肌细胞Smoothelin-B在与EOMAIDO+共培养96h、120h后表达显著上调,Syndecan-1则在共培养120h后表达下调,添加1-mT后这种效应被削弱。结论:采用改良的血管环翻转贴壁法能获得高纯度的SMCs,简单易行,且有效避免了外膜成纤维细胞及内膜内皮细胞的污染。可为实验研究提供细胞材料。低色氨酸(10μM)可抑制平滑肌细胞的增殖,而其代谢产物KYN只有在高浓度(200μ M)下才产生这种抑制作用,不认为两者对SMCs的表型转换有明显影响。IDO可抑制SMCs的增殖及去分化,促进SMCs向收缩型转换,尚不能认为这种效应由色氨酸饥饿及其代谢产物聚集所引起,可能存在其他作用机制尚待研究。