抗原表位作为抗原分子诱导特异性免疫应答的基本结构和功能单位，对抗原表位的深入研究，有利于我们了解蛋白质抗原的结构和功能特点，对表位疫苗的设计以及免疫检测等具有重要作用。本实验室前期对大黄鱼、鳜鱼、青石斑鱼、加州鲈等26种常见经济鱼类血清免疫球蛋白进行了系统的分析，并筛选出广识别谱的单克隆抗体。本研究在此基础上进行了深入的研究，利用噬菌体肽库确定广识别谱的单克隆抗体的抗原表位，为研发广识别谱的鱼类免疫球蛋白检测试剂奠定良好的基础。首先，对大黄鱼、鳜鱼的单克隆抗体的细胞株进行复苏，继代培养，诱导小鼠产生腹水，对所得到的腹水采用不同方法纯化，并测定效价和浓度。大黄鱼腹水先用饱和硫酸铵分步盐析法，再用IgM purification柱子进一步提纯。通过SDS-PAGE鉴定发现，采用IgM纯化柱二次纯化后，纯度明显提高。而鳜鱼仅利用proteinAsepharose cl-4B亲和层析法纯化，纯化前效价为0.982×10-8，纯化后效价提高了10倍，同样经过SDS-PAGE鉴定，结果表明蛋白杂带明显减少，达到高纯度，符合后续实验的要求。其次，对纯化后的腹水进行噬菌体肽库的淘洗，经过3轮筛选，阳性噬菌体得到有效的富集，ELISA检测结果显示每轮淘洗后其OD值都比前一轮有明显提高。第3轮筛选后的噬菌体铺板测滴度后，每板挑选6-7个蓝斑进行阳性噬菌体的扩增，用M13单链噬菌体DNA提取试剂盒，提取DNA并测序，结果鳜鱼的6个样品测出同一序列：CTTCCT CTG CCT ATT AAG AAT，根据所测得的DNA序列，推测其所编码的氨基酸序列为：LPLPIKN。而大黄鱼7个样品中有3个同一的序列： AGT TCTACTATTATG GAGCGT，其编码的氨基酸序列为：SSTIMER。根据Chou-Fasman法（氨基酸二级结构的预测法）推测这两株单抗的共同表位可能都是构象型的，通过后续的竞争性实验，噬菌体克隆上清与单抗竞争结合血清抗体实验，进一步验证了噬菌体所展示的模拟表位可被单抗识别，为血清抗体的竞争表位。最后，对大黄鱼的单抗进行特异性验证，利用BSA免疫锦鲤，并采集免疫后的第10、20、30天的尾静脉血，离心后，进行ELISA检测，结果表明免疫组锦鲤产生了特异性抗体，验证了大黄鱼2H5-F4单抗能与锦鲤的血清免疫球蛋白发生反应。并能通过单抗来检测血清抗体水平的变化，可以应用于鲤鱼的免疫检测。综上所述，本研究的结果对于开发广识别谱的鱼类免疫球蛋白检测试剂具有重要的参考价值。表位的确定有利于揭示抗原与抗体相互作用的机制，有助于研发用于鱼类血清Ig检测的试剂，还能加深对鱼类Ig进化的了解。