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目的:构建乙脑/寨卡(JE/ZIKA)嵌合病毒感染性克隆,拯救病毒,并对嵌合病毒生物学特征和免疫学特征进行鉴定,以探索该嵌合病毒株是否可以成为寨卡病毒候选疫苗株。方法:用基因克隆技术把乙脑疫苗株SA14-14-2的prM/E基因用寨卡病毒prM/E基因序列进行替换,构建JE/ZIKA嵌合病毒感染性克隆,并以其为模板体外转录得到RNA,将RNA电转染导入BHK21细胞包装获得JE/ZIKA嵌合病毒;采用噬斑法、间接免疫荧光技术和测序法鉴定嵌合病毒,并对嵌合病毒的生长特性、遗传稳定性和热稳定性进行鉴定;用嵌合病毒脑内、皮下和腹腔感染清洁级昆明鼠,测定嵌合病毒的脑内神经毒力、皮下神经毒力及腹腔神经毒力;并用嵌合病毒免疫昆明鼠,噬斑减少中和试验(PRNT)检测嵌合病毒产生中和抗体的能力;用不同剂量JE/ZIKA嵌合病毒免疫昆明鼠,2周后用JE/ZIKA脑内攻击,统计对昆明鼠的免疫保护能力;用JE/ZIKA嵌合病毒及JEV SA14-14-2分别免疫昆明鼠,并分别用乙脑野毒株SA14和JE/ZIKA攻击免疫鼠,统计病毒间的交叉免疫保护情况。结果:酶切实验结果表明成功构建JE/ZIKA嵌合病毒感染性克隆。RNA电转染BHK21细胞从培养细胞上清中获得嵌合病毒,嵌合病毒感染BHK21细胞可致细胞病变效应,嵌合病毒噬斑小于JEV SA14-14-2产生的噬斑。病毒测序结果证实,嵌合病毒拯救成功,除1343处突变外,其余无突变发生,间接免疫荧光可检测到嵌合病毒感染组E蛋白表达。用不同的感染复数(0.1,0.01,0.001)感染BHK21细胞,可得到相似的生长曲线,在感染复数为0.001时,感染后108小时,病毒滴度可达到6.8 logPFU/ml。热稳定实验说明嵌合病毒在液态无保护剂的情况下,滴度下降迅速,在37℃环境中放置24小时即失活。分别将嵌合病毒JE/ZIKA以皮下途径和腹腔途径接种昆明鼠,所有实验组小鼠在观察期内均健存,而JE/ZIKA嵌合病毒对昆明鼠脑内神经毒力LD50为2.4 PFU/0.03ml。使用JE/ZIKA嵌合病毒免疫昆明鼠后,中和抗体阳转率为100%,腹腔免疫组第2周中和抗体达到高峰,下降迅速,皮下免疫组中和抗体滴度较高,相对比较稳定。分别用嵌合病毒JE/ZIKA和JEV野毒株攻击嵌合病毒免疫的昆明鼠,JE/ZIKA攻击组呈现典型的剂量效应,2.7*10~5PFU嵌合病毒免疫保护率可达到90%,MEM免疫对照组保护率为0。用嵌合病毒JE/ZIKA免疫能一定程度保护小鼠免受乙脑的脑内攻击(保护率40%),用JEV SA14-14-2免疫能保护小鼠免受嵌合病毒JE/ZIKA脑内攻击(保护率90%)。结论:成功构建乙脑/寨卡嵌合病毒感染性克隆,并拯救得到嵌合病毒JE/ZIKA,该嵌合病毒免疫原性良好,但对小鼠有较强的脑内神经毒力,嵌合病毒和乙脑疫苗株也有一定的交叉免疫。