白色念珠菌SEY1p的表达、纯化与结晶

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动力蛋白三磷酸鸟苷水解酶超家族是一类催化三磷酸鸟苷水解的蛋白酶,这个家族有许多的成员,这些成员广泛参与细胞内的众多生物过程包括细胞器的分裂与融合、内吞作用、囊泡的分离和胞质分裂。尽管这些蛋白质在不同的生物过程中发挥多样性的作用,但它们却有着相似的蛋白质结构,即参与核苷酸结合和水解的氮端G结构域、中间结构域和调节三磷酸水解的效应结构域。SEY1p属于动力蛋白三磷酸鸟苷水解酶超家族中的一员,位于内质网膜上,其结构域组成包括一个氮端的三磷酸鸟苷结构域、一个预测的螺旋束、两个相邻的跨膜区和一个碳端的尾巴。在生物体内,SEY1p的缺失会导致内质网融合变慢,体外的实验表明含有SEY1p的脂质体能够以依赖三磷酸鸟苷的方式发生融合。这些说明了SEY1p参与调节同源内质网的融合,但其如何调节同源内质网的融合的分子机制尚不清楚。在这项研究中,通过大肠杆菌表达系统表达SEY1p除去跨膜区以外结构域,并利用Ni-NTA亲和层析和离子交换层析的方法进一步纯化获得蛋白,然后通过悬滴汽相扩散法获得了蛋白质晶体。最后,通过X射线衍射的方法得到一套分辨率为2.9?的数据,为进一步解析其结构,阐释SEY1p在内质网融合中是如何发挥其功能的奠定了基础。
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