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目的:探讨和厚朴酚(Honokiol,HNK)在体外实验中对烟曲霉菌的抑菌、杀菌特性,及其在烟曲霉菌感染所致角膜炎中的治疗效果以及相关机制。方法:1.利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测HNK对人角膜上皮细胞(HCECs)增殖能力的影响,获取无毒性的HNK浓度范围;通过细胞划痕实验观察HNK对HCECs迁移能力的影响,排除HNK影响溃疡愈合的浓度范围。2.采用微量稀释法测定HNK最小抑菌浓度(MIC);描绘HNK药物浓度时间作用曲线,获取HNK最小杀菌浓度(MFC)和起效时间。3.对粘附于HCECs的烟曲霉菌孢子进行HE染色,对烟曲霉菌表面形成的生物膜进行结晶紫(CV)染色,验证HNK对烟曲霉菌感染过程中粘附和生物膜形成阶段的抑制作用。4.通过检测曲霉菌细胞膜通透性实验,验证HNK抑菌过程中对烟曲霉菌细胞膜通透性改变的程度。5.建立小鼠烟曲霉菌性角膜炎感染和HNK干预的动物模型,通过裂隙灯观察小鼠角膜炎的病变过程、统计角膜炎的临床评分评估HNK在小鼠真菌性角膜炎的治疗效果。6.利用平板试验评估HNK对小鼠烟曲霉菌性角膜炎中真菌残存量的影响。7.采用RT-PCR、Western Blot、ELISA对小鼠真菌性角膜炎中相关模式识别受体和炎症因子的表达进行定量检测。8.利用流式细胞术对小鼠角膜炎中中性粒细胞进行定量测定、免疫荧光对中性粒细胞进行定位测定、MPO试验对成熟中性粒细胞中髓过氧化物酶进行定量测定。结果:1.在与HCECs相互作用的24小时内,不超过8μg/m L HNK溶液对细胞增殖和迁移能力无明显的抑制作用。2.HNK MIC90为8μg/m L;MIC99/MFC为12μg/m L,其对烟曲霉菌的抑制和杀灭作用具有时间依赖性和浓度依赖性,HNK(1.0×MIC,1.5×MIC)与烟曲霉菌孢子作用6小时后开始发挥明显抑菌作用,HNK(1.5×MIC)于24小时达到杀菌作用。3.HNK的浓度为8μg/m L时,烟曲霉菌发挥毒力作用的粘附、生物膜形成阶段均受到明显的抑制作用。4.HNK(8μg/m L)能够使烟曲霉菌细胞膜通透性增加达到杀死烟曲霉菌的目的。5.经过3天HNK的治疗,C57BL/6小鼠烟曲霉菌性角膜炎的病变程度,开始减轻;经过5天治疗,角膜炎临床表现明显减轻。6.平板试验显示,HNK治疗后,小鼠真菌性角膜炎中烟曲霉菌的残存量较PBS组明显减少。7.与病变程度变化趋势相同的是,HNK处理后,模式识别受体Toll样受体2(TLR-2)以及相关促炎因子HMGB1、IL-1β、TNF-α的基因和蛋白表达均较PBS处理组明显降低。8.HNK治疗后,流式细胞术检测小鼠角膜中参与炎症反应的中性粒细胞绝对数量和其在炎症细胞中所占比例均明显降低,免疫荧光染色显示角膜基质中的中性粒细胞明显减少、角膜水肿减轻、基质层排列较为规则,MPO明显下降。结论:HNK对烟曲霉菌具有明显的抑菌和杀菌作用,降低了烟曲霉菌孢子对上皮细胞的粘附能力,抑制了生物膜的形成,改变了细胞膜的通透性;在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中,HNK通过减少模式识别受体和促炎因子的表达、中性粒细胞浸润及角膜的活菌载量减轻角膜的病变程度,达到一定的治疗效果。