抗人血小板第4因子单克隆抗体(SZ-95)的研制及其应用研究

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由于血小板第4因子(PF4)分子量低,结构中保守区域多,使得用传统免疫方法制备抗人PF4单克隆抗体比较困难。本实验室用微量的人PF4,以脾内免疫结合常规免疫的方法使小鼠脾细胞产生足够的免疫反应,经细胞融合和筛选后,得到了一株稳定的高效价的IgG1亚类的抗人PF4单克隆抗体,命名为SZ-95。抗体的鉴定表明SZ-95特异性结合正常人血小板中PF4,不识别包含PF4分子中间大部分氨基酸序列的合成多肽(P34-58),以及与PF4高度同源的β-血小板球蛋白(β-TG)。因此我们用自备的SZ-95 IgG-Sepharose 4B亲和层析柱,直接从血小板破碎液中纯化到了具有生物活性的高纯度PF4。同时,以纯化的PF4制备了抗人PF4多克隆抗体,将其与单抗SZ-95一起进行肝素-PF4复合物ELISA,其结果显示抗体结合复合物的量呈肝素依赖性改变,而SZ-95识别抗原受肝素与PF4结合的影响。SZ-95将是深入研究PF4调控血栓形成和止血、造血和血管新生的分子机制和临床评价血小板活化状态的有效的工具。
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